磁激活细胞分选:一种分离 c-Kit 阳性细胞的方法

摘要

来源:Kesarwani， M. 等人<a href="https://www.jove.com/t/58194">评估 c-fos 和 dusp1 在癌基因依赖性中的作用的方法。J. Vis. Exp. （2019 年）。

该视频介绍了从小鼠骨髓中分离 c-kit 阳性细胞的技术。在该方案中，我们将从转基因小鼠中分离 c-kit 阳性细胞，以验证 c-Fos 和 Dusp1 单独或一起作为白血病的药物靶标。

方案

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

从骨髓中分离 c-Kit⁺ 细胞

1. 根据机构指南处死小鼠。
   注:在这里，根据 AVMA 推荐的流速将小鼠暴露于二氧化碳 （CO₂） 中，直到通过呼吸和心跳停止确定死亡，然后是颈椎脱位。
2. 从老鼠身上收获腿骨——两个股骨、两个胫骨、两个髂骨。用手术刀刮掉骨头上的所有组织。将腿骨放入冰上的 1x PBS 中 — 5 mL 装在 15 mL 试管中。将管子里的东西倒入研钵中，用杵压碎。
3. 使用移液管，通过 70 μm 细胞过滤器将细胞悬液过滤到 50 mL 螺旋盖管中，并连接 10 mL 移液器。用冷的 1x PBS 多次清洗研钵和研杵，收集细胞悬液并将其添加到 50 mL 试管中。在 4 °C 下以 1,200 x g 旋转骨髓 5 分钟。通过附有玻璃移液管的真空吸尘器去除上清液。用移液管将细胞沉淀悬浮在 5 mL 的 1x PBS 中。
4. 用移液管将悬浮的骨髓缓慢添加到 5 mL 室温（温度至关重要）聚蔗糖的顶部，非常小心不要干扰界面。在室温下以 400 x g 旋转 20 分钟，同时关闭制动器。
5. 用移液管收集混浊的总单核细胞 （TMNC....

材料