阴性免疫磁性选择:一种从外周血单核细胞中纯化 B 细胞的方法

摘要

来源:Serra S. 等人 基于 HPLC 的检测法监测人慢性淋巴细胞白血病细胞中的细胞外核苷酸/核苷代谢。J. Vis. Exp. （2016 年）

该视频介绍了一种通过免疫磁性靶向和从外周血单核细胞悬液中分离来纯化 B 细胞的方法。该方法涉及使用靶向特定细胞表面蛋白的特异性抗体或配体（与磁性颗粒相连）标记不需要的细胞类型，通过磁性分离从异质性细胞悬液中去除。

方案

1. 通过阴性分离纯化白血病 B 细胞

1. 在 PBS 0.1% 牛血清白蛋白 （BSA） 2 mM EDTA，pH 7.4（分离缓冲液）中重悬 10⁷ PBMCs/ml。
2. 加入 10 μg 小鼠单克隆抗 CD3、-CD14 和 -CD16 一抗，用于 10⁷ 个细胞，并在 4 °C 下孵育 30 分钟。
3. 用分离缓冲液洗涤细胞，并在 4 °C 下以 500 x g 离心 5 分钟。
将
4. 细胞重悬于分离缓冲液中，浓度为 10⁷ PBMC/ml。
5. 在与细胞一起孵育之前，将绵羊抗小鼠 IgG 磁珠重悬于小瓶中。将每 10 7 个细胞 100 μl 珠子转移到试管中。
6. 加入 1 mL 分离缓冲液，将试管放入磁铁支架中 1 分钟。用 5 ml 移液管弃去上清液。
7. 从磁铁上取下试管，将洗涤过的珠子重悬于 100 μl 分离缓冲液中。
8. 将 10⁷ 个细胞与 100 μl 磁珠在 4 °C 下孵育 30 分钟，同时轻轻倾斜和旋转。
9. 将试管放入磁铁支架中 2 分钟，然后用 5 ml 移液器将含有 CD19 ⁺ / CD5 ⁺ 未结合细胞的上清液转移到新试管中。

材料