阴性免疫磁珠分选：一种从外周血单个核细胞中纯化B细胞的方法

摘要

来源：Serra S. 等. 基于高效液相色谱法的检测方法用于监测人慢性淋巴细胞白血病细胞中外源性核苷酸/核苷的代谢. J. Vis. Exp. (2016)

该视频介绍了一种通过免疫磁珠靶向和分离外周血单个核细胞悬液来纯化B细胞的方法。该方法涉及使用特异性抗体或配体（与磁性颗粒相连）标记不需要的细胞类型，这些抗体或配体靶向特定的细胞表面蛋白，从而通过磁性分离从异质性细胞悬液中去除这些细胞。

方案

1. 通过阴性分离法纯化白血病B细胞

1. 将每毫升含10⁷ 个PBMC的细胞悬液用含0.1%牛血清白蛋白（BSA）和2 mM EDTA、pH 7.4的PBS（分离缓冲液）重悬。
2. 每10⁷ 个细胞加入10 µg小鼠单克隆抗CD3、抗CD14和抗CD16一抗，于4 °C孵育30分钟。
3. 用分离缓冲液洗涤细胞，于4 °C以500 × g离心5分钟。
4. 将细胞以每毫升含10⁷ 个PBMC的浓度用分离缓冲液重悬。
5. 在与细胞孵育前，将羊抗小鼠IgG磁珠在原瓶中充分重悬。每10⁷ 个细胞转移100 µl磁珠至新离心管中。
6. 加入1 mL分离缓冲液，将离心管置于磁力架上1分钟，用5 ml移液器弃去上清液。
7. 将离心管从磁力架上取下，将洗涤后的磁珠用100 µl分离缓冲液重悬。
8. 将10⁷ 个细胞与100 µl磁珠在4 °C轻柔倾斜并旋转孵育30分钟。
9. 将离心管置于磁力架上2分钟，用5 ml移液器将含有CD19⁺/CD5⁺ 未结合细胞的上清液转移至新的离心管中。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
人血
纯化的抗-CD3、抗-CD14、抗-CD16抗体	实验室自制		小鼠单克隆抗体
Dynabeads 羊抗小鼠IgG	Invitrogen	11031
磷酸盐缓冲液（PBS）	Amresco	E404-200TABS	片剂
牛血清白蛋白（BSA）	ID bio	1000-70	标准级
分离缓冲液			PBS 0.1% BSA 2 mM EDTA，pH 7.4
DynaMag-15 磁力架	Invitrogen	12301D	Dynal 磁珠分离器