胰岛移植：一种将胰岛植入小鼠眼前房用于活体成像的方法

摘要

来源：Nilsson, J.et. al. 活体纵向成像及定量分析人胰岛移植物及其在眼前房中宿主贡献细胞。J. Vis. Exp. (2020)。

本视频介绍了将人胰岛移植到小鼠眼球前房以监测人胰岛移植物再血管化的实验方案 体内它还有助于理解受体细胞与供体细胞在促进移植物包裹和血管化过程中的各自贡献。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核

1. 移植器械和手术台的准备

注意：所有外科器械应进行高压灭菌，手术台和器械需用70%酒精消毒。

1. 通过鼻罩将立体定位头架连接至麻醉装置，并打开加热垫。
2. 将无菌密封的汉密尔顿注射器连接至聚乙烯管和钝端眼用套管。
   注意：建议在组装前用磷酸盐缓冲液（PBS）充满所有部件。检查是否存在困住的气泡，如有则应清除。
3. 将汉密尔顿注射器牢固地固定在台面（图1a）或可移动底座（图1e）上，并将管路固定于体视显微镜，使套管自然下垂（即待用位置）。
   注意：建议使用手术胶带，因其易于拆卸和重新固定。
4. 准备一支1 mL注射器，连接30 G针头，并吸入0.1 mg/kg的丁丙诺啡溶液。
5. 准备一支含有无菌PBS的注射器，或 alternatively 使用移液器。
6. 准备一个干净的复苏笼，并配备加热灯。

2. 手术受体小鼠的麻醉与体....

结果

图1： 将胰岛移植至眼前房。
(a) 移植装置示意图，显示麻醉后的小鼠固定于立体定位头架上，暴露的眼睛（插图）位于已准备好的Hamilton注射器旁，注射器固定于实验台，体视显微镜就位，可用于拾取小鼠胰岛（b）或人胰岛（c）。(d) 装有胰岛的眼科套管处于等待位置。(e) 正在进行移植操作，(f) 示意图显示通过单侧切口，使用眼科套管尖端小心掀起角膜，并将胰岛释放至眼前房（g）。注射小鼠胰岛（h）或人胰岛（i）后立即拍摄的眼部图像。比例尺 = 500 µm。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
清洁工作台外套
加热垫			设定为 37 °C
Ivis Lumina ll 生物发光成像仪	Caliper		其他可选的生物发光成像系统包括&nbsp;<em>In vivo</em>&nbsp;F PRO（Carestream）和 Photon Imager（Biospace Lab）
解剖剪刀
持针钳（带齿）
针持
27 G 0.3 ml 胰岛素注射器	Terumo	T35525M2913