不可逆电穿孔：一种用于小鼠胰腺肿瘤消融的技术

摘要

来源：Shankara Narayanan, J. S.，等。用于研究不可逆电穿孔效应的同源性胰腺癌小鼠模型。J. Vis. Exp. (2018)。

本视频介绍了在小鼠中对胰腺肿瘤进行不可逆电穿孔（IRE）以实现非热消融的操作步骤。在高度可控的条件下，可成功对皮下（SQ）和原位肿瘤实施IRE治疗，从而为术后各类研究提供便利。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和JoVE兽医审查委员会的审核。

1. SQ 肿瘤的不可逆电穿孔治疗

1. 准备所需材料：方波电穿孔仪、安全脚踏开关、电极（阵列针式电极与镊式电极）及适配器。同时准备好无菌缝线（不可吸收4-0）、酒精棉片、毛发剪、脱毛膏、眼用润滑剂、棉纱布、丁丙诺啡及麻醉剂。
2. 使用气体灭菌法对镊子或针阵列电极进行灭菌。不建议使用高压蒸汽灭菌。在不同动物之间使用玻璃珠灭菌器对电极进行灭菌。
3. 当皮下肿瘤移植体直径达到5 mm时，按以下步骤成功诱导小鼠麻醉。简要而言，在手术前30分钟，皮下注射0.05–1 mg/kg的布托啡诺镇痛剂至受体小鼠。随后，使用精密挥发器（或其他麻醉剂）以2 L/min的氧气流速输送2–3%异氟烷对受体小鼠进行麻醉。整个操作过程中，将小鼠置于37 °C加热垫上。在眼睛上涂抹润滑剂以防止角膜干燥。通过无惊跳反射初步判断麻醉深度，并通过轻捏脚趾无足底反射确认达到外科手术麻醉平面。在整个手术过程中维持麻醉状态。
4. 将麻醉后的小鼠侧卧放置，以接触其侧腹部的皮下肿瘤。使用剃毛器去除毛发，并用酒精棉片清洁皮肤。
5. 对于SQ肿瘤，使用双针阵列电极。用镊子提起肿瘤部位正下方的皮肤，将电极平行于身体方向经皮插入，注意勿穿透腹膜腔。电极穿过皮肤后，应调整其位置，使其位于肿瘤两侧并形成夹持状。
6. 将电穿孔仪设置为....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
ECM 830 方波电穿孔仪	哈佛仪器公司	BTX # 45-0002 (58018-004)
2针阵列电极	哈佛仪器	45-0167
安全脚踏开关	哈佛仪器公司	45-0211
铂金镊子电极	哈佛仪器公司	45-0486
异氟烷	Sigma-Aldrich公司	792632
Lacrilube	Fisher Scientific	19090646
布托啡诺	Fisher Scientific	NC1292810
D-荧光素	Perkin Elmer	122799
IVIS Spectrum 活体成像系统	Perkin Elmer	124262
小鼠品系 C57BL/6J	杰克逊实验室	000664/Black 6
BD Precisionglide 注射器针头	Sigma-Aldrich公司	Z192406
酒精棉片（70%异丙醇）	BD	326895
一次性无菌手术刀	VWR	21909
棉签	VWR	89198
缝合针，45 厘米，6-0 规格	哈佛仪器	72-3308
缝合针，45 厘米，4-0 规格	哈佛仪器公司	72-3314
聚维酮碘 10%	BD	29900-404
一次性暖贴	KENT SCIENTIFIC CORP	TP-3E
小鼠毛发剪	KENT SCIENTIFIC CORP	CL8787
手术铺巾	哈佛仪器公司	59-7421