荧光正位小鼠模型：将表达GFP的癌细胞植入小鼠体内以评估肿瘤在体内的进展

摘要

来源：Moreno, J. A.，等。胰腺癌荧光原位小鼠模型。 J. Vis. Exp. (2016)

本视频展示了将表达绿色荧光蛋白的胰腺癌细胞原位植入小鼠胰腺的实验方案。该原位小鼠模型有助于研究新型治疗药物对原发性和转移性肿瘤的疗效。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和JoVE兽医审查委员会的审核。

1. 外科植入术

注意：确保所有外科材料和器械均为无菌状态。始终采用无菌技术操作。

1. 将加热垫放置在桌面上，并用无菌布单覆盖。设置麻醉机，并确保所有用品均在触手可及的范围内。
2. 将动物的鼻部放入麻醉面罩中，调节麻醉气体流量为1 L/min的氧气和2.5%异氟烷。
3. 用碘液轻轻擦拭动物的侧腹部，并用70%乙醇冲洗。重复此步骤三次。
4. 通过夹捏后肢足掌确认动物是否完全麻醉。若无反应，则表明动物已完全麻醉，可进行手术；若动物出现退缩反应，需确保蒸发器中的麻醉剂量充足，并给予更长时间使其完全进入麻醉状态。
5. 将约200 µl细胞悬液吸入一支带有18 G针头的1.0 ml结核菌素注射器中（预先冷却）。更换为27 G针头后，放回冰上保存，待使用时取出。
6. 定位脾脏的大致位置（腹部左上象限），用镊子夹起该区域的皮肤，使用手术剪剪开约1.0 cm的切口以形成皮下 pocket。同样，夹起脾脏上方的平滑肌并剪开，以进入腹膜腔。
7. 轻柔地夹住脾脏的尾端并将其拉出体外。胰腺将与脾脏相连。使用湿润的无菌棉签轻轻展开胰腺，并定位胰腺尾部。
8. 向胰腺尾部注射50 µl细胞悬液，留针10秒，然后缓慢旋转退出针头。成功的植入表现为局部出现无渗漏的浅表性气泡样隆起。
9. 将胰腺和脾脏复位至腹膜腔内。先缝合肌肉层，再单独缝合皮肤。使用6-0缝线或皮肤钉合器关闭切口。为避免动物疼痛，应皮下注射（SC）酮洛芬（5 mg/kg），每24小时一次；或 alternatively，每12小时皮下注射一次丁丙诺啡（0.05 - 0.1 mg/kg），持续36小时。 
10. 使动物从麻醉中恢复，并将其放回笼中。同时密切观察其疼痛表现。根据IACUC规程，或由主管兽医或其授权人员规定，动物必须在手术时（或更早，即预先）接受镇痛处理。对于出现疼痛的动物，必须依据IACUC规程或兽医处方提供额外的镇痛措施。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
含氯己定或泡沫型抗菌洗手液	Steris	639680
TB 注射器 27 G 1/2	Becton Dickinson	305620
异氟烷	Butler Schein	50562
酮洛芬	Fort Dodge Animal Health
外科剪刀，5.5"直型 Mayo	Henry Schein	22-1600
PANC-1 GFP 细胞系	Anticancer, Inc
小动物成像系统：iBox Scientia	UVP, LLC. Upland, CA.		用于在活体动物中观察荧光标记肿瘤的小动物成像系统
SutureVet PGA 6-0 PGA	Henry Schein	39010
PANC-1 GFP 细胞系	Anticancer, Inc
DPBS（杜氏磷酸盐缓冲液）	Thermo Fisher Sci	21300025