预靶向放射免疫疗法：一种将治疗性放射性核素靶向递送至肿瘤的方法

摘要

来源：Membreno, R.，等。基于逆电子需求Diels-Alder反应的预靶向放射免疫治疗。J. Vis. Exp. (2019)。

本视频介绍了预靶向放射免疫治疗（PRIT）技术，该技术通过先给予免疫偶联物，再给予放射性配体，以治疗肿瘤。这种放射免疫治疗可降低对健康组织的辐射剂量，并可使用半衰期极短、无法与基于抗体的载体兼容的放射性核素。

方案

涉及动物模型的所有操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. huA33-TCO 的制备

注意： 人源化A33-TCO的合成此前已有报道。然而，为方便读者理解，本文在此重新描述该过程，并对条件进行了优化调整。

1. 在1.7 mL微量离心管中，用无水二甲基甲酰胺（DMF）配制125 μL浓度为40 mg/mL（0.15 M）的(E)-环辛-4-烯基 2,5-二氧代-1-吡咯烷基碳酸酯（TCO-NHS）溶液。该溶液可分装后于-80 °C冷冻保存，供后续实验使用。
2. 在另一个1.7 mL微量离心管中，用1 mL磷酸盐缓冲液（PBS；含2.7 mM氯化钾、137 mM氯化钠和11.9 mM磷酸钾，pH 7.4）配制5 mg/mL的人源化A33抗体（huA33）溶液。
3. 使用少量（<5 μL）0.1 M Na₂CO₃溶液，将步骤1.2中抗体溶液的pH调节至8.8–9.0。使用pH试纸或配备微电极的pH计监测pH值，并注意避免pH超过9.0。
4. 向步骤1.3所述的抗体溶液中，缓慢加入相当于抗体摩尔量40倍的TCO-NHS体积。例如，若溶液中含有5 mg（30 nmol）huA33，则加入9.0 ....

结果

图1：(A) [ ¹⁷⁷Lu]Lu-DOTA-PEG₇-Tz放射性标记的示意图；(B) 典型的放射性iTLC色谱图，显示[¹⁷⁷Lu]Lu-DOTA-PEG₇-Tz的放射化学纯度>98%。

....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
(E)-环辛-4-烯基 2,5-二氧代-1-吡咯烷基碳酸酯（TCO-NHS） 	Sigma-Aldrich	764523	于 -80 °C 保存
2,5-二氧代-1-吡咯烷基 5-[4-(1,2,4,5-四嗪-3-基)苄基氨基]-5-氧代戊酸酯（Tz-NHS）   	Sigma-Aldrich	764701	于 -80 °C 保存
乙腈（MeCN）  	Fisher Scientific	A998-4
乙酸铵（NH4OAc）  	Fisher Scientific	A639-500
Boc-PEG7-胺（O-(2-氨基乙基)-O′-[2-(Boc氨基)乙基]六乙二醇）  	Sigma-Aldrich	70023	于 -20 °C 保存
二氯甲烷（DCM） 	Fisher Scientific	D143-1
二甲基亚砜（DMSO），无水  	Fisher Scientific	D12345
EMD Millipore Amicon Ultra-2 离心过滤装置 	Fisher Scientific	UFC205024
GE Healthcare 一次性 PD-10 脱盐柱  	Fisher Scientific	45-000-148
N,N-二甲基甲酰胺（DMF），无水 	Fisher Scientific	AC610941000
磷酸盐缓冲液（PBS）  	Fisher Scientific	70-011-044 	10 倍浓缩液
p-SCN-Bn-DOTA 	Macrocyclics	B-205 	于 -20 °C 保存
三乙胺（TEA） 	Fisher Scientific	AC157911000
三氟乙酸（TFA） 	Fisher Scientific	A116-50
肿瘤测量仪  	Peira 	Peira TM900