循环 miRNA 提取:一种通过有机提取和小 RNA 富集从血浆样品中分离 miRNA 的方法

Abstract

来源:Canale， M. 等人， 转移性结直肠癌患者中循环 MicroRNA 定制面板的检测。J. Vis. Exp. （2019 年）。

该视频介绍了使用有机提取后玻璃纤维柱富集从结直肠癌患者的血浆样本中提取循环 microRNA。miRNA 在血清和血浆等生物体液中稳定，这使它们成为癌症诊断、预后以及治疗决策和监测的理想循环生物标志物。这种方法将有助于识别能够预测患者临床结果的新循环生物标志物。

Protocol

注意:根据良好实验室规范 （GLP），在无菌通风橱下执行以下所有步骤。

1. 血浆采集和储存

1. 在 K3E EDTA 管中收集 3 mL 外周血样品。
在
2. 室温下以 1,880 x g 离心管 15 分钟。
3. 以 450 μL 的等分试样回收上清液血浆。
4. 将样品储存在 -80 °C 直至使用><。 注意:在收集后 2 小时内处理外周血管。从试管中回收血浆时，请勿干扰淋巴细胞层。

2. 从血浆样品中提取循环 miRNA

1. 准备所有必需的溶液并解冻用于提取步骤的样品。
   1. 将 375 μL 2-巯基乙醇添加到 2x 变性溶液中并充分混合。
   2. 向 miRNA 洗涤液 I 中加入 21 mL ACS 级 100% 乙醇并充分混合。
   3. 将 40 mL ACS 级 100% 乙醇加入洗涤液 2/3 中并充分混合。
   4. 让血浆等分试样在室温下解冻，然后开始提取步骤。

Materials