小鼠回肠切除模型：研究回肠切除术诱导的小鼠胆汁代谢变化

摘要

来源：Zhang, R.，等。 小鼠回肠切除术后肠道胆汁过度积聚模型的建立。 J. Vis. Exp. (2017)

本视频介绍了小鼠模型中肠切除手术的详细操作步骤。该技术有助于研究回肠切除术后小鼠肠道中胆汁酸吸收障碍、过度积聚及其毒性作用。

方案

1. 回肠切除术与吻合术

1. 将小鼠置于小型动物麻醉舱中，使用异氟烷（2 - 3%）进行麻醉。在异氟烷维持麻醉状态下，通过脚趾夹捏法判断麻醉是否充分。
2. 使用脱毛剂去除腹部毛发，并用外科海绵擦拭清除毛发，同时维持麻醉状态。将小鼠置于温控小型动物手术台 (图 1A) 上，以维持体温在 37 °C。通过面罩持续给予异氟烷（1 - 2%）维持麻醉，并对小鼠眼部涂抹眼用软膏。
3. 使用聚维酮碘和 70% 酒精清洁皮肤，并用无菌外科纱布覆盖腹部手术区域 (图 1B)。
4. 待麻醉生效后，使用手术刀沿腹中线做切口。用棉签轻轻保护肠道，并用牵开器拉开小鼠腹肌，充分打开并暴露腹腔 (图 1C)。
5. 定位盲肠。从盲肠开始，小心地将相连的回肠及部分空肠移出腹腔 (图 1D)。
   注意：即使在禁食后，盲肠因体积较大仍易于识别。
6. 使用 7-0 丝线结扎肠系膜上动脉的上支，以阻断拟切除回肠段的血液供应。结扎后，回肠颜色由粉红色变为深紫色 (图 1E - F)。
7. 根据实验目的，使用剪刀切除并移除 50% 或 90% 的回肠。
   注意：假手术组不进行肠系膜上动脉结扎，也不切除回肠。
8. 用 0.9% 生理盐水冲洗两个回肠断端的管腔。
   注意：由于残留的完整回肠仍由肠系膜上动脉正常供血，冲洗过程中会有少量血液流出。这也表明回肠断端血供正常，可确保吻合过程中无缺血发生 (图 1G)。
9. 找到两个回肠断端系膜侧的位置。对齐系膜方向，使用 8-0 缝线将回肠断端缝合在一起 (图 1G - H)。
10. 缝合回肠对侧，以使回肠吻合保持自然状态 (图 1I)。
11. 在原有两针缝线之间缝合上下两侧，彻底将两个回肠断端连接在一起 (图 1J)。
12. 完成三步缝合后，确认吻合口无渗漏 (图 1G-I)。将盲肠和小肠复位至腹腔内的原始解剖位置。使用钝针以温热的 0.9% 生理盐水冲洗手术区域 (图 1K)。
13. 使用 6-0 缝线关闭腹肌层切口。用镊子对齐腹部皮肤切口，并缝合皮肤以促进最佳愈合 (图 1L)。

2. 术后护理

1. 将术后小鼠转移至重症监护室进行恢复。将它们饲养在铺有纸垫料的笼子中，并置于温度可控的加热垫上，继续过夜术后恢复。除常规食物和水外，还需为小鼠提供软质食物。
2. 通过皮下注射给予布托啡诺（0.05 - 0.1 mg/kg），每8-12小时一次，用于镇痛。
   注意：若小鼠病情严重，应使用CO₂实施安乐死。
3. 在实验终点时，使用过量异氟烷处死小鼠，并根据需要采集样本（见第3节）。

3. 回肠切除术诱导的胆汁过度积聚的评估

1. 在切除小鼠0%（假手术）、50%或90%回肠后一天，称重并解剖小鼠。
2. 取出胃肠道并称重，计算胃肠道重量与体重的比值，以评估胆盐吸收不良及过度积聚的严重程度。
3. 将胃肠道放入15 mL圆锥形管中，用剪刀剪成短段。剪切后，以3,000 × g离心10分钟，将上清液（含胆盐的胃肠道液体）转移至洁净管中。
4. 测量胃肠道液体的总体积和总重量，并计算液体重量与胃肠道重量的比值，进一步评估胃肠道内胆盐的过度积聚情况。
5. 通过胆酸测定法测定上清液中总胆汁酸含量。

结果

图1：回肠切除术的手术步骤。 （A）使用温度可控的小动物手术台维持体温。（B）完成腹部皮肤准备后，用无菌纱布覆盖手术区域。（C）通过腹部正中切口暴露小肠。（D）盲肠（由白色虚线标出）用于定位回肠。暴露回肠（黄色虚线）和肠系膜上动脉分支（黄色箭头）。（E）结扎为回肠供血的肠系膜上动脉分支，结扎位置由黄色箭头指示。动脉结扎后，回肠颜色变为深紫色或黑色。缺血肠段由黄色虚线标出。（F）虚线表示缺血区与正常灌注回肠之间的分界；箭头指示回肠的缺血区域。（G）切断并移除缺血的回肠段，并用0.9%生理盐水冲洗断端（黄色虚线）。黄色箭头指示肠系膜侧。（H）将回肠两端缝合，并保持肠系膜对齐。黄色箭头指示肠系膜侧的第一针缝合位置。（I）缝合回肠对侧（黄色箭头...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
C57BL/6J	杰克逊实验室
解剖显微镜	奥林巴斯	SZ61	用于手术
动物体温控制器	Physitemp Instruments, Inc	TCAT-2LV	用于体温控制
异氟烷麻醉蒸发器	VetEquip	911104	用于麻醉
解剖镊	精细科学工具公司	11274-20	用于手术
剪刀	精细科学工具公司	14084-08	用于手术
持针器	Roboz 外科器械公司	RS-7882	用于手术
微型刀具-针状刀片	费舍尔科技公司	10318-14	用于手术
6-0 单股缝合线	Ethicon	1698G	用于腹部皮肤缝合
7-0 丝线缝合线	Ethicon	766G	用于结扎
8-0 单股缝合线	Ethicon	1714G	用于吻合
外科海绵	Dynarex 公司	3333	用于手术
小型棉签	费舍尔科技公司	23-400-118	用于手术
异氟烷	Piramal Healthcare Limited	66794-013-25	用于麻醉
盐酸丁丙诺啡	Reckitt-Benckiser Pharmaceuticals	12496-0757-1	用于镇痛
0.9% 氯化钠注射液	B. Braun Medical Inc.	0264-7800-10	用于冲洗/注射
聚维酮碘消毒液	Dynarex 公司	1413	用于皮肤准备
Puralube vet 软膏	Dechra 兽用产品公司	17033-211-38	用于眼部保护
脱毛乳液	Church & Dwight Co., Inc.		用于皮肤准备
重症监护单元	ThermoCare	FW-1	用于术后恢复
总胆汁酸检测试剂盒	健赞诊断公司	DZ042A-K01	用于胆汁酸检测