来源：Betzler, A. M.，等。 散发性结直肠癌的基因工程小鼠模型。J. Vis. Exp. (2017)。
本视频介绍了通过节段性腺病毒-cre感染建立结直肠癌小鼠模型的方法。被感染的结肠节段可导致黏膜局部发生肿瘤形成，最终发展为浸润性和转移性癌。该模型是研究癌症生物学及开展临床前治疗试验的理想平台。
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方法文章
节段性腺病毒-Cre感染：利用基因工程小鼠模型生成孤立性结直肠癌的技术
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2023年4月30日
本文内容
摘要
方案
所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。
1. 局部肿瘤诱导 通过 外科腺-cre感染
- 手术动物准备
注意： 几乎任何条件性（"floxed"）突变均可通过本方法诱导。建议使用与结直肠癌相关的基因突变，例如 Apc、Kras 或 Tp53。Cre 重组效率取决于待切除片段的大小，较大的 floxed 序列切除效率较低。应通过 PCR 在肿瘤中确认所有等位基因的重组情况。- 为建立结直肠肿瘤，建议采用以下条件性等位基因杂交，以构建基础的结直肠癌模型（括号内为 MGI 数据库编号）：
Apctm2Rak （MGI: 3688435）
Krastm4Tyj （MGI: 2429948）
Tp53tm2Tyj （MGI: 3039263） - 若需使用荧光报告等位基因（例如，用于检测微转移灶），请使用以下等位基因：
Gt(ROSA)26Sortm6(CAG-ZsGreen1)Hze （MGI: 3809522）
注意：
- 为建立结直肠肿瘤，建议采用以下条件性等位基因杂交，以构建基础的结直肠癌模型（括号内为 MGI 数据库编号）：
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结果
图1. 结直肠肿瘤的结肠镜图像（括号中为动物的条件等位基因）。
A. 正常远端结肠。 B. 腺病毒感染2周后的早期腺瘤。注意小鼠因携带GFP报告等位基因而呈现绿色。（Apctm2Rak, Krastm4Tyj, Gt(ROSA)26Sortm6(CAG-ZsGreen1)Hze）。 C. 晚期腺瘤（Apctm2Rak, Krastm4Tyj）。 D. 结直肠腺癌（结肠镜图像获取后经病理学确诊.......
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 杜尔贝科磷酸盐缓冲液 | Life Technologies GmbH | 14190169 | |
| 胰蛋白酶-EDTA（0.25%，酚红） | Life Technologies GmbH | 25200072 | |
| 0.9% 生理盐水 (E154) | Serumwerk Bernburg AG | 10013 | |
| 注射用水 | B. Braun Melsungen AG | 235144 | |
| Ad5CMV-Cre（腺病毒，c = 2E+11 PFU/mL） | 基因转导载体中心，爱荷华大学 | ||
| 15 mL、50 mL 离心管 | Greiner Bio-One GmbH | 188271/227270 | |
| Eppendorf管 1.5 mL / 2 mL | Sarstedt AG & Co. | 72,695,400 | |
| 培养皿 PS 100/15 mm（无菌，Nuclon） | Fisher Scientific GmbH | 10508921/ NUNC150350 | |
| 1 mL 注射器（无死体积） - Injekt-F SOLO | Braun/neoLab | 194291661 | |
| 30G 注射针 | BECTON DICKINSON | 304000 | |
| 七氟烷（Sevoflurane AbbVie） | AbbVie Germany GmbH & Co. KG | ||
| 医用氧气 | 液化空气医疗有限公司 | ||
| 布托啡诺（Temgesic） | Indivior Eu Ltd. | ||
| Bepanthen - 眼科软膏 | Bayer Vital GmbH | 10047757 | |
| 带氧气冲洗功能和七氟烷蒸发器的台式科研麻醉机 | 帕克兰科学 | V3000PS/PK | |
| 棉拭子 | Lohmann & Rauscher 德国 | 13356 | |
| 胰岛素注射器 EMG 1 mL（带30G针头） | B. Braun Melsungen AG | 9161627S | |
| 细孔管（内径：0.28 mm，外径：0.61 mm） | 史密斯医疗德国 8 | 800/100/100 | |
| 微型阿德森镊 | Fine Science Tools | 11018-12 | |
| 虹膜剪 - ToughCut | Fine Science Tools | 14058-11 | |
| Olsen-Hegar持针器 | Fine Science Tools | 12002-12 | |
| AutoClip试剂盒 | Fine Science Tools | 12020-00 | |
| PDS Z1012H 6/0 C1（外科缝线） | Johnson & Johnson Medical GmbH | Z1012H | |
| 弯曲显微Serrefine血管夹 | Fine Science Tools | 18055-05 | |
| 福加蒂弹簧夹 | 埃德华兹 | CDSAFE 6 | |
| 加热板 062 | Labotect | 13854 | |
| 伊西斯 - 毛发剃除器 | Aesculap - Braun | ||
| Cold Light Fountain XENON 175 | 卡尔·史托斯 | 20132101-1 | 卡尔·史托斯 Coloview 系统，美因茨 |
| 光纤导光缆 | 卡尔·史托斯 | 69495NL | 卡尔·史托斯 Coloview 系统，美因茨 |
| TRICAM 三芯片摄像机头 | 卡尔·史托斯（Karl Storz） | 20221030 | 卡尔·史托斯 Coloview 系统，美因茨 |
| TRICAM SLII 相机控制单元 | 卡尔·史托斯 | 20223011-1 | 卡尔·史托斯 Coloview 系统，美因茨 |
| 15" 平板显示器 EndoVue | 卡尔·史托斯（Karl Storz） | 9415NN | 卡尔·史托斯 Coloview 系统，美因茨 |
| HOPKINS 直视式望远镜，直径 1.9 mm；长度 10 cm，可高压灭菌，内置光纤导光 | Karl Storz | 64301AA | |
| 保护与检查鞘管 | Karl Storz | 61029C |
