激光显微切割：一种从三维类器官培养模型中分离侵袭性结直肠癌细胞的技术

摘要

来源：Bullock M. 等， 结直肠癌细胞与 Ex vivo 成纤维细胞三维模型中侵袭性肿瘤微环境的分子分析。J. Vis. Exp. (2014)。

该视频展示了以微米级精度对三维类器官共培养模型进行激光显微切割的过程。在三维类器官模型中，成纤维细胞等间质成分与癌源性上皮细胞进行三维共培养。该三维模型作为一种实验工具，可在接近生理条件的环境中研究肿瘤侵袭及癌-间质相互作用。

方案

1. 组织型制备：

成纤维细胞浸润的类器官凝胶的制备：

1. 在补充有10% FCS和292 μg/ml L-谷氨酰胺的DMEM中制备成每类器官含有5 × 10⁵ 个细胞的成纤维细胞悬液。
2. 在冰上按以下比例配制类器官凝胶：
   • •  7 体积的大鼠尾胶原：Matrigel 混合液（1:1）
   • •  1 体积的过滤灭菌10× DMEM
   • •  1 体积的FCS
   • •  1 体积含有5 × 10⁵ 个成纤维细胞的细胞悬液
     配制9个凝胶（每个凝胶1 ml），共准备10 ml，轻柔混匀以避免产生气泡。
3. 将1 ml凝胶混合液加入24孔板的每孔中，在37 °C、湿润环境中孵育1小时，使凝胶凝固。1小时后，在凝胶上方加入1 ml含10% FCS的DMEM/谷氨酰胺培养基，放回培养箱过夜。
4. 次日，吸除凝胶表面的培养基，并接种1 ml含有5 × 10⁵ 个结直肠癌上皮细胞的培养基。

凝胶包被尼龙膜的制备：

5. 提前准备好已灭菌并经高压灭菌处理的尼龙膜片，尺寸为 1.5 cm ×....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
结直肠癌细胞系——示例为 SW480	ATCC	ATCC CCL-228
胶原蛋白	BD 生物科学	354265
Matrigel	BD 生物科学	354234
尼龙膜	默克密理博	VVLP01300
金属网格	The Mesh Company	WSS20-A4	themeshcompany.com
激光显微切割平台	徕卡显微系统	Leica AS LMD
膜载玻片	分子器件公司
焦宁 Violet	默克密理博	1052350025