小鼠背部皮肤黑色素瘤样本的冻存皮肤组织块制备方案

摘要

来源：Moon, H.，等。 利用突变型黑色素细胞干细胞实现小鼠黑色素瘤发生的时空控制。J. Vis. Exp. (2019)

本视频介绍了分离含有黑色素瘤的小鼠背部皮肤并进行冷冻包埋以制备冷冻皮肤组织块的详细实验方案。该冷冻包埋的组织块可切片后进行显微镜检查，用于研究黑色素瘤的进展过程。

方案

所有涉及动物的实验程序均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 组织处理

1. 皮肤分离
   1. 开始前准备好以下物品：解剖器械、滤纸和纸巾。
   2. 根据批准的方案处死小鼠，并在继续操作前确认动物死亡。
   3. 使用毛发修剪器剃除背部皮肤区域的毛发，然后用无绒组织轻轻擦拭该区域以清洁表面。
   4. 用锋利的剪刀在尾部基部稍上方做一个小切口。
   5. 将大型钝头剪刀插入切口，分离皮下结缔组织。
   6. 沿组织边缘用锋利的剪刀小心地分离出目标皮肤区域。
   7. 将皮肤组织放置在干净的纸巾上，用钝头镊子拉伸皮肤，使其贴附于纸巾并保持紧绷。此步骤可为组织提供额外支撑，便于后续操作和处理，同时维持其形态。
      注意：操作时应仅接触皮肤组织的外围区域，因为镊子可能对皮肤造成损伤，这种损伤可在组织学检查中观察到。
2. 组织固定
   1. 将一张滤纸对折并做好相应标记。将带有纸巾衬底的皮肤样本紧贴折痕处放入折叠的滤纸中，确保样本平整，无折叠或皱褶。用订书钉封好滤纸开口的两侧，然后修剪多余部分，以便剩余滤纸可用于后续样本。
      

结果

图1：皮肤组织的分离与冷冻包埋。安乐死后，剃除小鼠背部目标区域的毛发，并将皮肤置于含有OCT的冷冻模具中进行包埋。图中小鼠身上的虚线表示中线。通常可沿中线分离出3至4块皮肤，编号为3-4的线段即代表其中之一；其中一块由矩形1/2/3/4标示。这些皮肤样本应如图所示包埋于OCT中。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
宠物毛发修剪器	Wahl	09990-502
脱毛膏	Nair	n/a	大多数药店有售
棉签	各种品牌
紫外灯泡	UVP	95-0042-08	型号 XX-15M 中波段紫外灯
200 证明乙醇	各种品牌		纯乙醇
Histoplast PE	费希尔科技	22900700	石蜡颗粒
10% 中性缓冲福尔马林	Sigma	HT501128-4L
O.C.T. 包埋剂	Thermo	23730571
组织包埋盒	Sakura	89199-430	用于 FFPE 处理
冷冻模具	Sakura	4557	25 × 20 mm
FFPE 金属模具	Leica	3803082	24 mm × 24 mm
异氟烷	各种品牌		兽用级
麻醉吸入系统	各种品牌		兽用级
精细剪刀	FST	14085-09	直头，锐/锐
精细剪刀	FST	14558-09	直头，锐/锐
镊子	FST	11252-00	Dumont #5
镊子	FST	11018-12	Micro-Adson
Tyr-CreER; LSL-BrafV600E; Pten f/f	Jackson Labs	13590
LSL-tdTomato	Jackson Labs	7914	ai14