基于 CUBIC 的蛋白质表达可视化:在全层小鼠皮肤活检中可视化蛋白质表达的程序

Abstract

来源:Liang， H. et al. CUBIC 实验步骤可在全细胞皮肤制备物中以单细胞分辨率可视化蛋白质表达。J. Vis. Exp （2016 年）

该视频介绍了基于 CUBIC 的可视化技术，这是一种依赖于组织清除的成像技术，用于以 3D 单细胞分辨率对整个皮肤活检中的蛋白质表达进行视觉评估。这种技术简单的方案允许在不准备皮肤切片的情况下可视化皮肤蛋白质。

Protocol

所有涉及动物的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 透明小鼠皮肤组织的制备

注意:本研究中使用的所有小鼠都具有 C57BL/6 遗传背景

1. 小鼠皮肤组织的收集。
   1. 通过颈椎脱位对小鼠进行人道安乐死。
   2. 用修剪器小心去除相关皮肤区域的毛发，注意不要伤到皮肤。
   3. 用 70% 乙醇的磷酸盐缓冲盐水 （PBS） 清洗皮肤以净化。
   4. 用镊子提起颈部背侧皮肤，然后用剪刀切开。
   5. 解剖大面积的小鼠背侧皮肤（约 1.5 x 4 厘米）。
   6. 在滤纸上将皮肤平整，真皮面朝下，并记下样品的前后方向。
   7. 修剪解剖皮肤周围的滤纸，并放入装有新鲜制备的 4% 多聚甲醛 （PFA） PBS 溶液的 15 mL 试管中。
   8. 在室温下固定 1 小时，或在 4 °C 的冰箱中过夜。
   9. 在 15 mL 试管中用 PBS 清洗皮肤 2x 5 分钟><。 注意:以下 （1.1.10 - 1.1.12） 是组织长期储存的可选步骤。
   在
   10. 室温下进行 1 小时的洗涤步骤，在 15 mL 试管中加入浓度递增的乙....

Results

图 1:成像室的准备。答:制备成像室所需的耗材是蓝色粘性、橡皮泥或类似物，以及 2 个盖玻片 （24 x 50 mm）。B:准备两条蓝色粘性细条（直径约 2 毫米 x 2 厘米）和两张盖玻片。C:将蓝色粘性条放在一张盖玻片上，为皮肤活检留出足够的空间。将皮肤活检结果放入两条试纸之间的一滴 CUBIC2 溶液中。D:将第二个盖玻片放在蓝色粘性条上，以覆盖皮肤活检。

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Materials