肿瘤细胞侵袭实验：一种基于三维体外天然基质的上皮-间质细胞相互作用评估方法

摘要

来源：Ng, Y. Z. 等。 肿瘤间质微环境的组织工程构建及其在癌细胞侵袭研究中的应用。J. Vis. Exp. (2014)

本视频介绍了利用天然基质研究肿瘤细胞侵袭的技术。该检测方法能够在三维环境中评估上皮-间充质细胞相互作用，而无需使用合成或外源性基质。

方案

1. 培养基与试剂的准备

1. 200倍L-抗坏血酸-2-磷酸盐储备液的制备
   1. 每5 mL杜氏改良伊格尔培养基（DMEM）溶液中溶解29 mg L-抗坏血酸-2-磷酸盐，并通过0.22 μm膜滤器过滤。分装为0.25 mL无菌等份，于-20 °C保存。
   2. 在需要当天，向每50 mL成纤维细胞培养基（含1% L-谷氨酰胺和10%胎牛血清的DMEM）中加入0.25 mL 200倍L-抗坏血酸-2-磷酸盐储备液，使L-抗坏血酸-2-磷酸盐终浓度为0.1 mM。
2. 角质形成细胞生长培养基的制备
   1. 原代鳞状细胞癌（SCC）角质形成细胞的分离与培养方法已有先前报道，其中亦描述了角质形成细胞生长培养基的制备方法。
   2. 简要而言，按如下方式配制培养基：
      300 mL DMEM 和 100 mL Ham's F-12，添加10% FBS
      0.4 mg/mL 氢化可的松
      5 mg/mL 胰岛素
      10 ng/mL 表皮生长因子（EGF）
      5 mg/mL 转铁蛋白
      8.4 ng/mL 霍乱毒素
      13 ng/mL 三碘甲状腺原氨酸
      1x 青霉素-链霉素溶液

结果

图1. 成纤维细胞来源的天然基质构建及肿瘤侵袭实验流程。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
L-抗坏血酸-2-磷酸 	Sigma	A8960
含L-谷氨酰胺、4,500 mg/L D-葡萄糖、110 mg/L 丙酮酸钠的DMEM培养基  	Life Technologies	11995-073
100倍青霉素-链霉素溶液  	Life Technologies	15070
凡士林 	VWR	PROL28908.290
克隆环 	Sigma	Z370789
亲水性尼龙网滤膜圆片，孔径 100 μm，直径 25 μm，每包100片 	Millipore	NY1H02500
弯曲的不锈钢丝网支撑架  	自制		尺寸设计为可放入6孔板中