肿瘤细胞侵袭试验:一种基于 3D 体外天然基质的评估上皮-间充质细胞相互作用的方法

摘要

来源:Ng， Y. Z. et al. 肿瘤基质微环境的组织工程及其在癌细胞侵袭中的应用。J. Vis. Exp.（2014 年）

该视频介绍了利用天然基质研究肿瘤细胞侵袭的技术。该测定中使用的技术提供了在 3D 环境中评估上皮-间充质细胞相互作用的能力，而无需合成或外来基质。

方案

1. 培养基和试剂的制备

1. 制备 200x L-抗坏血酸 2-磷酸原液
   1. 每 5 mL Dulbecco 改良 Eagle 培养基 （DMEM） 溶液溶解 29 mg L-抗坏血酸 2-磷酸盐，并通过 0.22 μm 膜过滤器过滤。在 -20 °C 下以 0.25 mL 无菌等分试样储存。
   2. 在所需日期，向每 50 mL 成纤维细胞培养基（含 1% L-谷氨酰胺和 10% 胎牛血清的 DMEM）中加入 0.25 mL 等分试样的 200x L-抗坏血酸 2-磷酸原液，最终浓度为 0.1 mM L-抗坏血酸 2-磷酸。
2. 角质形成细胞生长培养基的制备
   1. 原发性鳞状细胞癌 （SCC） 角质形成细胞的分离和培养之前已经描述过。其中还描述了角质形成细胞生长培养基的制备。
   2. 简而言之，请按如下方式准备介质:
      300 mL DMEM 和 100 mL Ham's F-12 补充有 10% FBS
      0.4 毫克/毫升氢化可的松
      5 毫克/毫升胰岛素
      10 ng/mL EGF
      5 mg/mL 转铁蛋白
      8.4 ng/mL 霍乱毒素
      13 ng/mL 碘塞罗氨酸
      1x 青霉素 - 链霉素溶液

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结果

图 1.成纤维细胞衍生的天然基质的生成和肿瘤侵袭测定的工作流程。

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材料