最小红斑剂量测定:一种在小鼠模型中测量紫外线敏感性的方法

摘要

来源:Amaro-Ortiz， A. et al. 人源化小鼠模型中表皮黑色素的药理学诱导和防止晒伤。J. Vis. Exp.（2013 年）

该视频介绍了一种在人源化小鼠模型（一种模拟人类皮肤的小鼠模型）中测量紫外线敏感性的方法。我们确定可能导致皮肤红斑或水肿的紫外线辐射的最小红斑剂量 （MED）。该方法可以帮助找出用于降低紫外线敏感性的药物的疗效。

方案

所有涉及动物的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

通过计算"最小红斑剂量"（MED） 来确定紫外线敏感性

1. 使用已用载体或毛喉素预处理的动物。通过腹膜内注射氯胺酮和甲苯噻嗪的标准混合物麻醉动物。
2. 准备一块用于 MED 测试的紫外线遮挡胶带。要在胶带上打孔，请使用带有 1 cm² 圆形切口的重型打孔器（图 1A 和 B）。在胶带上具有确定大小和对称排列的孔有助于识别照射后的皮肤变化。在胶带的每个孔上，贴上一小块易于拆卸的胶带，该胶带可以在 UV 暴露期间的特定时间取下，以允许施用不同的 UV 剂量。
3. 一旦动物得到充分的镇静，将胶带放在背表面。应始终在麻醉下使用眼部润滑剂。
4. 打开由两个 Westinghouse F15T8UV-B 灯组成的紫外线源，峰值输出为 313 nm，范围为 280-370 nm。让灯管平衡到由带有 UVB 传感器的 UV 光度计测量的恒定 UV 输出（灯管通常需要几分钟才能预热）。
5. 根据紫外光度计测得的紫外线透射率，计算每个所需剂量的紫外线曝光时间。例如，我们灯的 UVB 输出值为 2.4 mW/cm²。因此，要施用 5 kJ/m²，皮肤需要暴露于 208 秒（即 3 分 28 秒）的 UVB 辐射，计算如下:
   
6. 将镇静的动物（每只动物都用封闭胶带固定）腹面向下放置，以确保均匀的紫外线照射。要施用所选剂量的紫外线辐射，请依次取下覆盖孔的小封闭胶带，以将 1 cm² 的皮肤区域暴露在正确剂量的辐射下。因此，使用上面的例子，如果 40 kJ/m² 是实验中的最大剂量，那么动物将在灯下总共 27 分钟和 47 秒，并且在 40 kJ/m² 条件下的皮肤将在整个时间内没有覆盖胶带。但是，当曝光剩余 208 秒时，覆盖在 5 kJ/m² 条件下的胶带将被移除。磁带移除的时间应使每个条件同时结束。
7. 紫外线照射后，小心地从背面皮肤上撕下胶带，注意不要用突然或过于用力的动作撕裂皮肤。将动物放在温暖安静的地方，以便从麻醉中恢复。
8. 监测小鼠 24-48 小时，以寻找与暴露于特定剂量紫外线照射的解剖部位相对应的红斑（发红）或水肿（肿胀）的隐蔽区域。以照片方式记录皮肤发现。
9. MED 值对应于引起炎症的最小紫外线剂量，定义为整个暴露的皮肤圈的红斑和/或水肿。请注意，皮肤色素沉着可能难以确定 MED，但是，红斑和水肿通常仍然可以准确评估，部分原因是在紫外线照射期间胶带中孔的形状明确。

结果

图 1.毛喉素诱导的黑色素化可防止紫外线介导的炎症，由最小红斑剂量 （MED） 测试确定。（A，B） 用载体或毛喉素每天两次（A、C）或每天一次（B、D、E）处理动物的紫外线遮挡胶带的位置和 UVB 剂量，持续 15 天 （B、D、E）。 最后一次局部治疗在照射前 48 小时进行。通过使用带有冲孔 1 cm2 圆孔的 UV 封闭胶带，背部皮肤暴露于不同剂量的 UVB，并改变暴露时间以产生适当的剂量。照射后，在一些实验中用笔标记暴露皮肤的圆圈。MED 定义为特定剂量下整个暴露皮肤圈的红斑和/或水肿，在暴露后 48 小时确定。MED ± SD 结果报告为 kJ/m2 UVB，* p≤0.001。（E） 酪氨酸缺陷型 K14-Scf 白化扩展小鼠用载体处理 10 天的皮肤颜色反射计和 MED 值

材料