从肿瘤制备类器官：一种三维体外肿瘤模型

摘要

来源：Wadosky, K. M. 等人。利用前列腺癌转基因小鼠模型生成肿瘤类器官。J. Vis. Exp. (2019)。

由肿瘤衍生的类器官是一种三维细胞培养模型，能够维持肿瘤的病理特征和器官特异性的细胞谱系。在本示例方案中，我们将看到科研人员利用基因工程小鼠模型中的前列腺肿瘤组织生成类器官。

方案

本文所述动物实验程序已获得纽约州布法罗市罗斯韦尔帕克综合癌症中心实验动物资源部机构动物照护与使用委员会（IACUC）的批准。

注意：用于解剖分离前列腺或前列腺肿瘤以建立类器官的雄性小鼠，应至少达到性成熟年龄——约为8至10周龄。不同研究中所使用小鼠的具体年龄可能有所不同。在选择小鼠年龄时需考虑的因素包括：前列腺细胞群体的年龄依赖性变化、特定启动子驱动的Cre转基因表达的年龄依赖性，以及特定基因工程小鼠模型（GEMM）中前列腺肿瘤进展的速度。

注意： 图1 展示了肿瘤类器官生成步骤的示意图。

1. 准备

1. 根据 Drost 的方法制备小鼠前列腺类器官培养基 等 使用条件培养基替代Noggin和R-Spondin的重组蛋白，并将Noggin和R-Spondin条件培养基的终浓度均调整为1%（v/v），而非10%。
   注意： 稳定转染 HA-小鼠 Noggin-Fc 或 HA-小鼠 Rspo1-Fc 的 HEK293 细胞分别用于制备 Noggin 或 R-Spondin 条件培养基。这些细胞系由斯坦福大学 C....

结果

图1：生成前列腺肿瘤类器官的实验流程图。 解剖前列腺肿瘤后，将组织切成约1 mm大小的组织块。用胶原酶消化组织块，收集细胞后，再用胰蛋白酶消化以获得单细胞悬液。计数细胞后，重悬于适量基质胶中，使细胞浓度达到1.0 × 10⁶ 个细胞/mL。采用逐滴加入法将细胞悬液滴加至培养皿中形成穹顶状结构。请点击此处查看该图的高清版本。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
0.25% 胰蛋白酶+2.21 mM EDTA	Sigma	25-053
A83-01	MedChemExpress	HY-10432
Advanced DMEM/F12+++	Gibco	12634
分析天平	Mettler Toledo	30216623
B27 (50倍浓缩)	Gibco	17504044
胶原酶II	Gibco	17101015
EHS肉瘤基质，Pathclear批号#19814A10	由Trevigen生产	从弗雷德里克国家实验室的美国国家癌症研究所申领	持有美国国家癌症研究所资助项目的人员可申请该基质
HEPES (1 M)	Sigma	25-060
人重组表皮生长因子（EGF）	PeproTech	AF-100-15
L-谷氨酰胺 (200 mM)	Sigma	25-005
N-乙酰-L-半胱氨酸	Sigma	A9165
青霉素-链霉素	Sigma	P4333
精密天平	Mettler Toledo	30216561
单刃碳素剃须刀片	Fisherbrand	12-640
Y-276632 (ROCK抑制剂)	APExBIO	A3008