建立转移性子宫内膜癌模型：一种在兔模型中诱导子宫内膜癌伴淋巴结转移的技术

摘要

来源：Lauren Philp 等。利用体内传代培养的 VX2 细胞构建具有腹膜后淋巴结病变的原位子宫内膜癌模型。J. Vis. Exp. (2019)

本视频展示了通过将高转移性的VX2细胞悬液注射到兔结扎的子宫角中，建立子宫内膜癌兔模型的方法。该方法可成功诱导原发性子宫内膜癌并伴有腹膜后淋巴结转移。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 体外VX2细胞系的建立

1. 从兔股四头肌中收获 VX2 肿瘤并在小鼠 flank 部位进行移植生长。
   1. 解冻冷冻的 VX2 肿瘤组织块（1 cm × 1 cm），在培养皿中使用手术刀片将其切碎，并通过加入少量 Hanks 平衡盐溶液（HBSS）逐步冲洗，使所有细胞通过 70 µm 滤网，最终体积为 1 mL。
   2. 计数细胞，并用 0.9% 磷酸盐缓冲盐水溶液稀释至浓度为 1 × 10⁷/mL，置于冰上无菌管中。
      注意：肿瘤组织块由实验室合作者提供，来源于既往在兔股四头肌中传代培养的 VX2 肿瘤。
   3. 使用 2–5% 吸入式异氟烷麻醉雌性新西兰白兔（体重 2.5–3.5 kg），去除注射部位的毛发，并用聚维酮碘溶液清洁注射区域。将 500 µL 制备好的 VX2 细胞悬液（5 × 10⁶ 个细胞/mL）注射至兔股四头肌内。从第 10 天开始临床监测肿瘤生长情况。
   4. 当肿瘤直径达到 1–1.5 cm（使用游标卡尺体外测量）时，采用兽医批准的方法处死兔子。通过检测心率和呼吸频率确认动物死亡。用聚维酮碘溶液清洁局部区域后，使用无菌器....

结果

图1：子宫缝合。 黑色箭头 = 缝线，红色箭头 = 子宫角。

....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
11号刀片手术刀，无菌，一次性	Aspen Surgical (VWR)	80094-086
22号耳静脉导管	CDMV	14332
3-0 可吸收多股缝合线（Polysorb）	Covidien	356718
3-0 编织可吸收缝合线（Polysorb）	Covidien	356718
70 µm 细胞筛，独立包装，尼龙材质	Falcon	352350
乙酰丙嗪（Atravet）	CDMV	1047
聚维酮碘皂液（7.5% 聚维酮碘）	CDMV	4363
聚维酮碘溶液（10% 聚维酮碘）	UHN Stores	457955
丁丙诺啡	McGill University
头孢唑林	UHN 住院药房	无需货号
氯己定溶液	CDMV	119872
Corning BioCoatCellware I 型胶原，100 mm 培养皿	Corning	354450	品牌不重要
Corning BioCoatCellware I 型胶原，24 孔板	Corning	354408	品牌不重要
Corning BioCoatCellware I 型胶原，6 孔板	Corning	354400	品牌不重要
Corning Matrigel 基底膜基质，*无动物源成分，10 mL	Corning	354234
DMEM/HAM F12 1:1	Life Technologies	11320	品牌不重要
DMSO	Caledon Lab Chem	10/1/4100
恩诺沙星（Baytril 注射液）	CDMV	11242
Falcon 离心管	Corning Centri-Star	430828
胎牛血清，经认证，加拿大来源，500 mL	Life Technologies	12483020	品牌/来源不重要
异氟烷	UHN 住院药房	无需货号
碘海醇造影剂	GE Healthcare	407141210
美洛昔康（Metacam 0.5%）	CDMV	104674
生理盐水	院内品牌（UofT 医药商店）	1011
PBS	Multicell 或 Sigma	331-010-CL 或 D8537-500mL
青霉素/链霉素（100 mL；10000 U 青霉素，10000 µg 链霉素）	Corning-Cellgro	CA45000-652
无菌 Hank's 平衡盐溶液（无 Ca++，无 Mg++，无酚红）	T.C.M.F (Dr Bristow)	2011年1月28日
外科粘合剂（组织粘合剂）	3M Vetbond	14695B
胰蛋白酶（0.25%），蛋白质组学级	Sigma	T-6567-5X20UG
胰蛋白酶-EDTA，0.05%，100 mL	Wisent Inc	325-542-EL	品牌不重要