腹腔注射细胞：一种将癌细胞递送至小鼠模型腹膜脂肪组织的方法

摘要

来源：Krishnan, V. 等. 研究卵巢癌转移定植于腹膜脂肪中乳斑结构的方法. J. Vis. Exp. (2015)

在本视频中，我们通过腹腔注射卵巢癌细胞悬液至小鼠模型，以研究卵巢癌细胞在腹膜脂肪组织中的定植及其后续转移过程。 

方案

所有涉及动物的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 细胞腹腔注射

注意：在我们的实验中，为了降低病原体暴露的风险，小鼠操作均在屏障设施内的层流洁净台或生物安全柜中进行。为了清晰展示该技术，配套视频中的操作是在经批准可用于动物实验的实验室中完成的。 该特定技术无需对动物实施麻醉。根据经批准的实验方案，应在活体动物上进行此操作。本研究应使用适当的小鼠品系。例如：研究人卵巢癌细胞（SKOV3ip.1 和 HeyA8）定植时，使用免疫缺陷型裸鼠（athymic nude mice）；研究小鼠卵巢癌细胞（ID8）定植时，使用免疫健全的 C57BL/6 小鼠。

1. 将500 µl卵巢癌细胞的单细胞悬液吸入注射器中，并装上无菌带帽的25 G针头。此操作可减少注射前细胞受到的剪切力。
2. 用一只手抓住小鼠颈部的皮肤，用掌心和食指固定尾巴，并将小鼠的左后肢夹在无名指与小指之间（当用左手固定小鼠时）。
   注意：为避免损伤腹腔器官，应充分固定小鼠，使其在注射过程中无法移动。
3. 想象一条位于膝盖上方的腹部横线，在动物右侧靠近中线处确定一个穿刺点。穿刺点位于最后一对乳头的头侧并略偏内侧。
   注意：从小鼠右侧插入针头可避开盲肠，降低刺破肠道的风险。
4. 将针头插入小鼠腹部外侧下部区域，深度约为0.5 cm。回抽针栓以确认针头未刺入血管或其他腹腔器官。
   1. 若回抽出任何液体，则丢弃该注射器（及样本）。若回抽液呈绿色-棕色或黄色，分别提示针头已刺入肠道或膀胱。
5. 以缓慢而稳定的压力注入样本。拔出针头后将小鼠放回笼中。在丢弃至锐器容器前，切勿将针帽重新盖上。
6. 在注射后的特定时间点，通过CO₂ 窒息法处死小鼠并取出重要器官。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
DMEM	Corning	10-013-CV
PBS	Corning	21-040-CV	不含钙和镁
26 号针头	BD	329652