获取腹膜脂肪组织：一种研究小鼠模型中卵巢癌定植腹膜脂肪组织的技术

摘要

来源：Krishnan, V. 和 等。 体内 和 离体 研究卵巢癌转移定植于腹膜脂肪中乳斑结构的方法 J. Vis. Exp. (2015)

在本视频中，我们使用一只携带卵巢癌的雌性小鼠的安乐死模型。随后介绍一种用于识别并提取与五个主要腹膜器官相关的脂肪库或脂肪组织的方案，以研究转移性癌细胞的定植。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 实验动物的准备

1. 让动物适应新的饲养环境，以恢复因运输和操作可能引起的生理影响。
   注意： 以下技术适用于所有市售品系的小鼠。实验所用动物数量应根据研究设计确定，并需咨询统计学家。

2. 腹膜脂肪库的鉴定与分离

1. 通过过量 CO₂ 处死动物，并采用第二种物理方法确认死亡。
2. 由于采集腹膜脂肪库属于内脏器官摘除（第二种方法），需在靠近阴部乳头处沿中线切开腹膜壁，以暴露内脏器官（图 1A）。
3. 对于大网膜脂肪（OM），用镊子将脾脏从腹腔中拉出，暴露大网膜/胰腺复合体（图 1C）。紧贴组织连接处修剪，将大网膜从胰腺和脾脏上分离。确保切除所有残留的胰腺组织。
4. 对于性腺脂肪（GF），用镊子提起围绕卵巢的性腺脂肪，并切断组织连接将其切除（图 1A 右上）。
5. 对于子宫脂肪（UF），用镊子提起围绕子宫角的子宫脂肪，并切断组织连接将其切除（图 1A 右下）。
6. 对于肠系膜脂肪（MF），切断小肠与幽门之间的连接。用镊子牢固夹住小肠的游离端，缓慢将其从肠系膜脂肪上“剥离”。使用解剖剪刀从肠系膜根部释放肠系膜脂肪（图 1A 左下）。
7. 对于脾门脂肪（SF），用镊子提起脾脏远端，暴露连接脾门与胰腺的细薄脂肪带。先将脾门脂肪从胰腺上分离，再小心地从脾脏上解剖下来，完成切除（图 1B）。

结果

图1. 主要腹膜脂肪组织库的相对位置和结构。（A） 大体解剖图显示五个主要腹膜脂肪来源中的四个的相对位置。图中示出网膜（OM；轮廓线标出）、性腺脂肪（GF）、子宫脂肪（UF）、肠系膜（MY）、卵巢（ov）、子宫角（uh）和小肠（si）。（B） 用镊子提起脾脏后暴露的脾门脂肪（SP；轮廓线标出）。（C） 小鼠网膜从胰腺上分离后展示，以改善观察视野。（D） 切除后的腹膜脂肪的相对大小和结构；肠系膜显示仍附着于肠系膜根部。（E） 腹膜脂肪组织的组织学评估，用于检测乳斑（milky spots）的存在—...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
解剖工具	 Fine Science Tools	NA
磷酸盐缓冲液（PBS）	 Corning	21-040-CV	不含钙和镁