从实体标本中获取原发性卵巢癌细胞：一种培养卵巢肿瘤标本中上皮性卵巢癌细胞的方法

摘要

来源：Pribyl, L. J. 等. 从实体标本中获取原发性卵巢癌细胞的方法. J. Vis. Exp. (2014)

在本视频中，我们介绍一种从实体卵巢肿瘤组织样本中分离和鉴定原发性卵巢癌细胞的方法。采用本方案获得的上皮癌细胞适用于研究可能导致卵巢癌发生与发展的相关过程。

方案

所有涉及人类参与者的操作均按照机构、国家和国际关于人类福祉的指南进行，并已通过当地机构审查委员会的审查。

1. 组织处理

1. 在无菌条件下，将样本转移至含有10 ml新鲜冰浴PBS的培养皿（60 mm × 60 mm）中，并使用无菌剃刀片进一步切成尽可能小的组织块（2 mm或更小）（图1A和1B）。
2. 将切碎的组织转移至含有10 ml预热（37 °C，30分钟）的dispase II（2.4 U/ml）DMEM溶液的15 ml锥形管中，在5% CO₂、37 °C条件下孵育30分钟。为确保组织充分消化，每5分钟手动振荡细胞悬液一次。
3. 孵育30分钟后，使用10 ml移液管将细胞悬液转移至置于50 ml锥形管上方的细胞筛网（70 μm孔径）上，并用注射器活塞轻轻按压筛网表面。弃去未消化的组织（残留在筛网上方），收集滤过的细胞悬液至50 ml无菌锥形管中。在4 °C条件下，以320 × g离心7分钟（图2）。
4. 弃去上清液，并将细胞沉淀重悬于10 ml含10% FBS的DMEM培养基中。
5. 将细胞悬液置于培养皿中，在5% CO₂、37 °C条件下孵育（图3）。
6. 初次接种24小时....

结果

图 1. 临床样本的处理。A) 将固体样本转移至含有 10 ml 新鲜冰冻 1× PBS 的培养皿中。B) 将临床样本进一步切割成约 2 mm 大小的组织块

图 2.<.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
1x PBS，无菌	Invitrogen	14190-144
螺旋盖聚丙烯标本<br/> 容器，无菌	Thermo Scientific
DMEM 培养基，无菌	Invitrogen	11995-065
胎牛血清，无菌	Thermo Scientific Hyclone	SH30396.03
100x 青霉素-链霉素溶液，液体	Invitrogen	15140-122
Dispase II，无菌	Roche	04942 078 001
小型精细镊子和手术刀<br/> 刀片，无菌	Fisher Scientific	镊子：08-953E，刀片：<br/> 08-927-5D
小型解剖剪刀，无菌	Fisher Scientific	08-945
15 ml 锥形带盖离心管，无菌	BD Falcon	352097
50 ml 锥形带盖离心管，无菌	BD Falcon	352027
10 ml 血清移液管，无菌	Corning	13-678-11E
6 ml 注射器活塞，无菌	Tyco Healthcare	8881516911
尼龙滤膜（70 &mu;m）细胞筛网，<br/> 无菌	BD Falcon	352350
5 cm 培养皿，无菌	Corning	430166
10 cm 培养皿，无菌	Corning	430167