Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells from Solid Specimens: A Method to Culture Epithelial Ovarian Cancer Cells from Ovarian Tumor Specimens

doi:10.3791/30026

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Research Article

从实体标本中获取原代卵巢癌细胞:一种从卵巢肿瘤标本中培养上皮性卵巢癌细胞的方法

July 8, 2025

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Abstract

来源:Pribyl， L. J. et al. 从实体标本获取原代卵巢癌细胞的方法。（2014 年）

在本视频中，我们描述了一种从实体卵巢肿瘤组织标本中分离和表征原发性卵巢癌细胞的方法。使用该方案获得的上皮癌细胞适用于了解可能导致卵巢癌发生和发展的过程。

Protocol

所有涉及人类参与者的程序均已按照机构、国家和国际人类福利指南执行，并已由当地机构审查委员会审查。

1. 组织处理

在无菌条件下工作，将样品转移到装有 10 ml 新鲜冰冷 PBS 的培养皿（60 mm x 60 mm）上，并使用无菌剃须刀片，进一步切成尽可能小的块（2 mm 或更小）（图 1A 和 1B）。
将切碎的组织转移到含有 10 ml 预热（37°C 30 分钟）分散酶 II （2.4 U/ml）的 DMEM 锥形管中，并在 5% CO₂ 和 37°C 下孵育 30 分钟。为确保标本的最佳消化，每 5 分钟手动搅拌一次细胞浆液。
孵育 30 分钟后，将细胞浆液转移（使用 10 ml 血清移液管）到放置在 50 ml 锥形管顶部的细胞过滤器（70 μm 网）上，并使用注射器柱塞对网施加轻微压力。丢弃任何未解离的组织（残留在网片顶部），并将获得的细胞悬液收集在 50 ml 无菌锥形管中。在 4 °C 下以 320 x g 离心 7 分钟（图 2）。
弃去上清液，将细胞沉淀重悬于 10 ml 含有 10% FBS 的 DMEM 中。
将细胞悬液在培养皿中于 5% CO₂ 和 37 °C 孵育（图 3）。
初始铺板 24 小时后更换培养基。这允许去除细胞碎片和培养物中存在的大多数红细胞。
在接下来的两周内，每三天更换一次培养基，之后原代 EOC 的培养物已准备好用于下游应用。

Representative Results

图 1
图 1.临床标本的处理。A）将固体标本转移到含有 10 ml 新鲜冰冷的 1x PBS 的培养皿上。B）临床标本进一步切成约 2 毫米大小的块

图 2
图 2.从未解离的组织分离 EOC 细胞。酶消化后，将临床标本转移到细胞过滤器上，并使用注射器柱塞对消化的临床标本施加温和的压力。这允许 EOC 从结缔组织中机械分离并恢复 EOC 细胞

图 3
图 3.

Disclosures

No conflicts of interest declared.

Materials

<表格border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"> 1x PBS，无菌 Invitrogen 公司 14190-144 螺旋盖，聚丙烯样品
容器，无菌 Thermo Scientific 公司 DMEM 培养基，无菌 Invitrogen 公司编号 11995-065 胎牛血清，无菌 Thermo Scientific 海克隆 SH30396.03 100x 青霉素 - 链霉素，液体 Invitrogen 公司 15140-122 Dispase II，无菌罗氏电话 04942 078 001 小细尖镊子和手术刀
刀片，无菌 Fisher Scientific 公司镊子:08-953E，刀片:
08-927-5D 小解剖剪刀，无菌 Fisher Scientific 公司编号 08-945 15 ml 锥形管，无菌 BD 猎鹰 352097 50 ml 锥形管，无菌 BD 猎鹰 352027 10 ml 血清移液管，无菌康宁 13-678-11E 6 ml 注射器柱塞，无菌泰科医疗保健 8881516911 尼龙过滤器（70 μm）池过滤器，
无菌的 BD 猎鹰 352350 5 cm 培养皿，无菌康宁 430166 10 cm 培养皿，无菌康宁 430167

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