来源：Crowell, P. D. 等。利用类器官培养评估小鼠前列腺上皮细胞的分化能力。J. Vis. Exp. (2019)
在本视频中，我们演示了使用基质凝胶环培养技术对分离的小鼠前列腺上皮细胞进行培养。该方法可为研究遗传或药物干预下前列腺上皮细胞分化形成三维腺样结构的能力提供补充信息。
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方法文章
前列腺类器官检测：一种基于基质凝胶环的体外培养技术用于研究前列腺上皮细胞的分化能力
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2023年4月30日
本文内容
摘要
方案
1. 将分选的前列腺上皮细胞接种至原代小鼠类器官培养体系 — 耗时：2–3 小时（不包括聚HEMA包被培养板的制备）
注意： 培养板需用 Poly-HEMA 包被，以防止基质凝胶下方孔板表面形成二维菌落。在将分选后的基底或腔内前列腺上皮细胞接种至小鼠类器官培养前 1 天，预先制备 Poly-HEMA 包被的培养板。在步骤 1.1 开始前 2 小时，将 1 mL 减少生长因子的基质凝胶（以下简称为基质凝胶）在冰上解冻。在进行步骤 1.1 前，应立即将 Y-27632（ROCK 抑制剂）加入小鼠类器官培养基中。步骤 1.1–1.8 应在冰上操作。
- 在4 °C条件下，以800 × g 离心5分钟，使细胞在5 mL圆底管中沉淀，随后吸除上清液。
- 用500 µL小鼠类器官培养基（表1）洗涤细胞沉淀。
- 在4 °C条件下，以800 × g 离心5分钟使细胞再次沉淀，并吸除上清液。
- 将细胞重悬于小鼠类器官培养基中，细胞密度为1,000个细胞/µL。
- 为配制主混合液，将悬浮于小鼠类器官培养基中的上皮细胞与基质胶混合，最终形成含25%细胞/培养基和75%基质胶的混合物。基底细胞通常以每80 µL ....
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 胎牛血清（FBS） | Sigma | F8667 | |
| B-27添加剂（50倍浓度，无血清） | Thermo Fisher Scientific | 17504044 | |
| 高级DMEM/F-12培养基 | Thermo Fisher Scientific | 12634010 | |
| µ-皿 35 mm，高壁 | Ibidi | 81156 | |
| Matrigel GFR 基底膜基质 | Corning | CB-40230C | |
| 青霉素-链霉素（10,000 U/mL） | Thermo Fisher Scientific | 15-140-122 | |
| 聚（2-羟乙基甲基丙烯酸酯）（Poly-HEMA） | Sigma | P3932-25G | |
| Y-27632二盐酸盐（ROCK抑制剂） | Selleck Chemical | S1049-50MG | |
| A83-01 | Tocris | 2939 | |
| 双氢睾酮（5α雄烷-17β-醇-3-酮） | Sigma | A-8380 | |
| GlutaMAX | Thermo Fisher Scientific | 35050061 | |
| Normocin | Thermo Fisher Scientific | ant-nr-1 | |
| 重组人EGF，无动物成分 | PeproTech | AF-100-15 | |
| 重组人Noggin | PeproTech | 120-10C | |
| RPMI 1640培养基，含HEPES（cs为10） | Thermo Fisher Scientific | 22400105 | |
| Halt磷酸酶抑制剂 | Thermo Fisher Scientific | 78428 | |
| 完全蛋白酶抑制剂混合物 | Sigma | 11836145001 | |
| Triton X-100 | Sigma | X100-5ML | |
| 超声破碎仪 | Thermo Fisher Scientific | FB120 |
