从小鼠泌尿生殖系统中提取前列腺:一种将雄性小鼠前列腺与其他泌尿和生殖系统器官分离的技术

所有涉及动物的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 泌尿生殖系统 （UGS） 解剖

注:原理图如图 1 所示。

1. 使用 CO₂ 吸入安乐死方法或其他批准的技术对 3 个月大的雄性 C57BL/6 小鼠实施安乐死><。 注意:3 至 12 个月大的小鼠可以成功用于实验。年龄较大的小鼠（> 6 个月）很可能在 UGS 周围有更多的脂肪，需要清除。在 3 个月以下的小鼠中，识别和分离叶通常很困难。其他菌株也可用于实验。
2. 将鼠标放在它的背上，用别针固定腿，使动物的腹侧露出来。
3. 将 70% 乙醇喷洒在小鼠的腹部并擦拭干净。
   注意:解剖前不需要剃掉腹部毛发。
4. 用一对中等钝镊子从腹部提起皮肤和肌肉层，然后用剪刀在腹部做一个倒 Y 形切口。
   1. 首先，用一把锋利的剪刀从阴茎正上方到胸骨做一个笔直的切口（图 2a）。
   2. 从切口底部向每个脚趾切开，直到大腿（图 2b）。将两侧和底部的皮肤向后折叠，以查看整个腹部区域（图 2c-e><）。 注意:切割大小因鼠标的年龄和大小而异。初始笔直切口的大小可能在 1.5 到 4 厘米之间，具体取决于鼠标的大小。
5. 移动到其他器官上以露出 UGS。提起并移动棕黄色的肠（图 2f）。用镊子拿起腹部脂肪垫（不透明的白色海绵组织）并将它们移动到两侧（图 2g><）。 注意:UGS 包括精囊、尿道、前列腺、输精管 （vas deferens） 和膀胱。它可以通过一对特征性的不透明白色半圆弓（即精囊）来识别，充满液体的膀胱囊附着在基部。位于精囊正下方的半透明组织是前列腺。
6. 找到 UGS，用钝钳牢牢抓住膀胱，从小鼠腹部向上提起整个 UGS。
   注意:如果膀胱已满，请先用小注射器将其排空，以便更好地夹住镊子并降低膀胱破裂的风险。
7. 继续拉起膀胱，将一把剪刀滑到膀胱和前列腺下方，一直滑到脊柱，然后剪开。切开与腹腔的任何剩余连接（图 2h 和 2i）。小心不要切得太靠近 UGS，以免意外切开任何前列腺组织。
   注意:在 UGS 下进行切割时，应将剪刀一直插入鼠标的背面，以便切口也能捕捉到脊柱。这种方法导致一次剪断 UGS 和腹腔之间的几乎所有连接，从而减少了从小鼠中提取组织所需的时间。
8. 取出 UGS 并将其放入 6 cm 培养皿中的 2-6 mL（足以覆盖组织）磷酸盐缓冲盐水 （PBS） 或 Dulbecco 改良的 Eagle 培养基（DMEM，高葡萄糖）中（图 2j 和 2k），并将其移至解剖显微镜（10 倍放大）><中。 注意:根据其余步骤中的要求更改解剖培养基。

图 1:示意图流程图，展示了小鼠泌尿生殖系统解剖和前列腺分离。第 1 节中描述的协议步骤的流程图

图 2:小鼠 UGS 的解剖。从 3 个月大的小鼠解剖 UGS 的分步图像:（a 和 b） 做切口，（c-e） 拉回皮肤露出腹部区域，（f） 移动肠道，（g） 移动腹部脂肪垫，（h 和 i） 从腹腔中提取 UGS，（j） 提取的 UGS，（k） 提取的 UGS 具有不同器官和组织标记如下:SV（黄色）= 精囊;P（红色）= 前列腺;F （紫色） = 脂肪;V（浅蓝色）= 输精管;B （绿色） = 膀胱。