从小鼠泌尿生殖系统中分离前列腺：一种将雄性小鼠前列腺腺体与其他泌尿及生殖器官分离的技术 关键词：前列腺分离，小鼠，泌尿系统，生殖系统，雄性小鼠，器官分离

摘要

来源：Nath, D. 等. 小鼠前列腺叶的鉴定、组织学表征及体外三维球体培养模型的分离。J. Vis. Exp. (2018)

在本视频中，我们介绍了从雄性小鼠模型中分离泌尿生殖系统（UGS）的操作步骤。该泌尿生殖系统可在体外进一步解剖，以分离前列腺组织，并研究其在前列腺癌发生过程中的作用。

方案

所有涉及动物的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 泌尿生殖系统（UGS）解剖

注意：示意图见图1。

1. 使用CO₂处死一只3月龄雄性C57BL/6小鼠₂ 吸入式安乐死方法或其他经批准的技术。
   注意： 3至12个月大的小鼠可用于实验并取得良好效果。老年小鼠（> 6个月）的小鼠尿道生殖窦（UGS）周围可能含有较多脂肪组织，需予以清除。在3个月以下的小鼠中，通常较难辨认并分离腺体叶。本实验亦可使用其他品系的小鼠。
2. 将小鼠仰卧放置，用针固定四肢，使其腹侧朝上暴露。
3. 用70%乙醇喷洒小鼠腹部并擦拭干净。
   注意： 解剖前无需剃除腹部毛发。
4. 用一把中号钝头镊子提起腹部的皮肤及肌肉层，用剪刀在腹部做倒Y形切口。
   1. 首先，用一把锋利的剪刀从阴茎上方至胸骨处做一条直线切口。图2a).
   2. 从切口基部向每个脚趾方向切割，直至大腿处（图2b）。将两侧及底部的皮肤向后折叠，以暴露整个腹部区域（图 2c-e).
      注意： 切口大小根据小鼠的年龄和体型而定。初始直线切口的长度可能为1.5至4厘米，具体取决于小鼠的体型。
5. 将其他器官移开以暴露尿生殖窦。提起并移开黄褐色的肠管（图 2f）。用镊子夹起腹部脂肪垫（不透明的白色海绵状组织），并将其移至两侧（图 2g).
   注意： 泌尿生殖系统包括精囊、尿道、前列腺、输精管和膀胱。可通过一对特征性的不透明白色半圆形弓状结构（即精囊）进行识别，其基部连接着充满液体的膀胱囊。位于精囊正下方的透明组织为前列腺。
6. 找到泌尿生殖系统（UGS），用钝头镊子牢固夹住膀胱，并将整个UGS从小鼠腹部向上提起。
   注意： 如果膀胱充盈，应先用小注射器排空膀胱，以增加镊子的抓握空间，并降低膀胱破裂的风险。
7. 继续向上牵拉膀胱，将一把剪刀滑入膀胱和前列腺下方直至脊柱处，进行剪切。切断与腹腔之间任何残留的连接图2h和2i注意不要过于靠近尿道生殖隔（UGS），以免意外切穿任何前列腺组织。
   注意： 在剪开尿生殖窦（UGS）下方时，应将剪刀一直插入小鼠体后部，使剪切动作同时切断脊柱。该方法可在一次剪切中几乎完全切断UGS与腹腔之间的所有连接，从而缩短从小鼠体内取出组织所需的时间。
8. 移除尿道球腺（UGS）并将其置于含有 2-6 mL 磷酸盐缓冲液（PBS）或高糖 Dulbecco 改良 Eagle 培养基（DMEM）的 6 cm 培养皿中（液体量以充分覆盖组织为宜）图2j和2k）并转移至解剖显微镜下（10倍放大）。
   注意： 根据后续步骤的需要更换解剖液。

结果

图1： 小鼠泌尿生殖系统解剖及前列腺分离的示意图流程。 本流程图对应第1节所述实验方案的操作步骤

图 2：小鼠泌尿生殖窦（UGS）的解剖。 ...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
小鼠手术器械<br/>（小鼠解剖工具包）	World Precision Instruments	MOUSEKIT
解剖显微镜
解剖培养基（DMEM +<br/> 10% FBS）	Thermofisher Scientific	11965-084
胎牛血清	Thermofisher Scientific	10438018