使用显微作进行单细胞采样:一种从癌细胞悬液中分离单细胞的技术

Abstract

来源:Chen S. et al. 用于单细胞下游表征的靶细胞预富集和全基因组扩增。J. Vis. Exp. （2018 年）

该视频介绍了从靶细胞池中分离单个细胞以进行下游分析的技术。在这种方法中，安装在显微镜上的显微作器用于高精度分离单个目标细胞。

Protocol

1. 单单元采样

1. 显微作
   注:为了实现全基因组分析 （WGA） 等下游应用，将分离的单细胞添加到 2 μL 细胞裂解预混液中。根据要处理的细胞数量制备预混液。计算因移液而损失的额外体积，并将细胞裂解预混液置于冰上。
   1. 准备细胞裂解预混液（WGA 试剂盒的组分，材料和试剂表）。简而言之，混合 2.0 μL 反应缓冲液、1.3 μL 辛基苯氧基聚乙氧基乙醇（10% 溶液）、1.3 μL 4-（1,1,3,3-四甲基丁基）苯基聚乙二醇（10% 溶液）、2.6 μL 蛋白酶 K 溶液和 12.8 μL 不含 RNase/DNase 的水，得到 10 个样品的预混液（总体积 20 μL><）。 注意:对于更多样品，请相应地增加体积。     
   2. 使用油笔画出一个区域，将细胞悬液固定到位。如果细胞密度太高，请调整面积和体积（即，在载玻片上标记更大的区域，加载 1x PBS 和等分试样的细胞悬液）。
   3. 将整个目标细胞悬液移液到载玻片上。
   4. 将载玻片转移到配备显微作器的显微镜上。让细胞沉降 5 分钟。
   5. 准备 0.2 mL PCR 管，其中装有 2.0 μL 细胞裂解预混液（在步骤 1.1.1 中制备）并将其储存在冰上。
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Materials