使用激光捕获显微切割进行单细胞采样:一种从异质细胞群中收获靶细胞的技术

Abstract

来源:Chen S. et al. 用于单细胞下游表征的靶细胞预富集和全基因组扩增。J. Vis. Exp. （2018 年）

该视频介绍了使用激光捕获显微切割从异质细胞群中获得单个细胞的技术。单个分离的细胞可用于进一步的基因组研究或癌症研究。

Protocol

1. 单单元采样

1. 激光显微切割
   注意:将单细胞添加到 4.5 μL 细胞裂解预混液（WGA 试剂盒的组分、材料和试剂表）中用于 WGA。
   1. 根据 Czyż 等人，混合 5.0 μL 反应缓冲液、1.3 μL 辛基苯氧基聚乙氧基乙醇（10% 溶液）、1.3 μL 4-（1,1,3,3-四甲基丁基）苯基-聚乙二醇（10% 溶液），制备细胞裂解预混液，制备 2.6 μL 蛋白酶 K 溶液和 34.8 μL 不含 RNase/DNase 的水，以获得 10 个样品的预混液（总体积 45 μL）。将预混液置于冰上。
      注意:对于更多样品，请相应地增加体积。
   2. 对适用于激光显微切割的膜涂层载玻片进行紫外线处理。将载玻片放入 DNA 交联剂装置中，并在最高紫外线下暴露约 10 分钟。
   将
   3. 膜包被的载玻片组装在细胞离心机中，并以 300 x g 的离心法将整个细胞悬液喷洒 5 分钟
      注意:当使用液体系统时，将细胞离心到载玻片溶液上，在细胞离心后去除上清液，并以 1140 x g 的离心干离心 1 分钟。
   4. 直接进行激光显微切割或让细胞离心涂片风干过夜，并将样品在 -20 °C 下冷冻以长期储存。
   5. 将 4.5 μL 细胞裂解预混液移液到 0.2 mL PCR 管的盖子中，并通过激光显微切割收获单细胞。
   6. 从激光显微解剖显微镜中取出 PCR 管并关闭管。通过短时间旋转收集管底的所有液体，并将样品置于冰上。
   7. 在进一步处理之前，进行单细胞 WGA 或将分离的样品在 -80 °C 下储存长达 1 个月。

Materials