使用激光捕获显微切割进行单细胞采样:一种从异质细胞群中收获靶细胞的技术

来源:Chen S. et al. 用于单细胞下游表征的靶细胞预富集和全基因组扩增。J. Vis. Exp. （2018 年）

该视频介绍了使用激光捕获显微切割从异质细胞群中获得单个细胞的技术。单个分离的细胞可用于进一步的基因组研究或癌症研究。

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<表格border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"> McCoy's 5A 培养基 （1x） 补充剂，含 L-谷氨酰胺 赛默飞世尔科技 16600-082 用于 HT-29 细胞的培养基，使培养基适应用于实验的细胞系 HEPES 缓冲溶液 （1 M） PAA 系列 编号 S11-001 McCoy's 5A 培养基的添加剂 Fetal Bovine Serum Gold （黄金胎牛血清） PAA 系列 编号 A15-151 McCoy's 5a 改良培养基的补充剂 青霉素 - 链霉素 （100x） 生物西 编号: L0018-100 McCoy's 5a 改良培养基的补充剂 磷酸盐缓冲盐水 （1x PBS） 赛默飞世尔科技 编号 10010-015 Accutase 生物西 L0950-100 系列 细胞分离溶液（细胞培养） 水浴 GFL 类型 1003 用于预热溶液 孵化器 赛默飞世尔科技 用于细胞孵育（细胞培养） 50 mL 反应管 VWR 525-0403 辊式混合机 斯图尔特科学公司 SRT6D 系列 用于将细胞附着到金属丝上，同时防止细胞沉淀 CellTrace CFSE 细胞增殖试剂盒 赛默飞世尔科技 编号 C34554 用于标记活细胞（细胞质标记） 赫斯特 33342 H3570 赛默飞世尔科技 用于 DNA 染色（核酸复染） 离心机（配备用于容纳 15 mL 和 50 mL 反应管） 赛默飞世尔科技 贺利氏 Megafuge 40R 用于沉淀细胞 Observer Z1 （荧光/激光显微切割显微镜） 卡尔蔡司显微成像 能够进行激光显微切割的倒置（免疫荧光）显微镜;荧光显微镜必须能够检测 Hoechst 33342（DAPI 滤光片）和 CFSE（FITC 滤光片） 牛血清白蛋白 （BSA） 西格玛-奥德里奇 A4503-50G 用于玻璃/塑料表面涂层 MS1 小型摇床 西格玛-奥德里奇 Z404039 用于涡旋 Detektor CANCER03 DC03 吉鲁皮 GIL003 系列 能够分离和分离 EpCAM 阳性细胞的功能化金属丝（也称为 catch&release，C&R） 注射器针头 （G20） VWR 613-0554 用于刺穿橡胶帽，以便让C&R的非功能部分穿过它。 Neubauer 腔室 罗斯 T729.1 用于计数细胞 巴斯德移液器 150 mm Volac D810 系列 用于细胞对C&R的小体积应用 油笔 达科 第 2002 季 用于载玻片，将细胞悬液固定到位 Delfia PlateShaker 板式摇床 珀金·埃尔默 1296-003 年 用于细胞分离过程中的搅拌 1.5 mL 管 Eppendorf 埃本多夫 30,125,150 元 Ampli1 WGA 试剂盒 Silicon Biosystems 公司 通过 Silicon Biosystems 订购 0.2 mL PCR 管 生物酶 710920 细胞离心机和设备 海蒂诗 通用 32 使用手头的细胞离心机 热循环仪 生物辐射 DNA 引擎二元组 每个带加热盖的热循环仪都可以使用 微量离心机 罗斯 CX73.1 系列 使用手头的台式离心机 UV Stratalinker 1800 系列 Stratagene 400072 使用手头的 DNA 交联剂

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