肾包膜肿瘤异种移植：一种用于评估前列腺癌发生的实验动物模型构建技术

摘要

来源：Nicholson, T. M. 等. 肾包膜异种移植与皮下颗粒植入用于评估前列腺癌变及良性前列腺增生。J. Vis. Exp. (2013)

在本视频中，我们展示了将人源前列腺癌组织移植物植入免疫缺陷小鼠肾包膜的技术。该技术可用于评估肿瘤进展并开发新的治疗策略。

方案

所有涉及动物模型的实验步骤均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医评审委员会的审核。

1. 手术步骤：肾包膜异种移植

1. 在实施麻醉前，观察小鼠以确保其健康状况良好。
2. 将小鼠放入异氟烷麻醉诱导室，浓度设为 3-5%。当动物停止活动且呼吸频率降低时，将其转移至俯卧位的鼻罩中，并以 1-3% 的浓度维持麻醉。
3. 如有必要，使用电推剪剃除小鼠背部毛发。使用裸鼠（athymic nude, nu/nu）时无需剃毛。
4. 对伸展的后足趾间蹼施加稳固压力，以评估麻醉深度。若小鼠对压力有反应，则需延长麻醉起效时间。必要时可轻微调整麻醉气体流量，以达到充分麻醉状态。
5. 当小鼠达到充分麻醉后，用外科碘伏（如 Betadine）溶液对术区进行消毒，随后使用 70% 酒精脱碘。
6. 穿戴无菌手套和手术衣；在手术区域覆盖无菌手术巾。用有齿镊提起背部皮肤，使用粗剪刀沿背侧中线做 2-3 cm 长的切口。
7. 使用钝头剪刀或探针，将切口下方的真皮层与体壁分离（双侧移植时两侧均分离，单侧移植时仅分离一侧）。
8. 将小鼠重新置于侧卧位，通过肌肉壁观察肾脏轮廓以定位肾脏。用拇指和食指在腹部施加轻柔的手动压力，有助于可视化内部器官。
9. 使用精细虹膜剪，注意避开主要血管和脊神经，沿脊柱方向在体壁上做 1 cm 长的切口。将剪刀插入初始切口后，轻轻扩大开口至 1.5-2.0 cm（略长于肾脏长轴）。
10. 用食指和拇指在肾脏两侧的肌壁外施加轻柔压力，使肾脏外置。将皮肤边缘折叠至外置肾脏下方，使其自然置于体壁上。在肾脏外置期间，应持续滴加无菌生理盐水以保持肾包膜湿润。
11. 使用精细 #5 镊子轻轻提起肾包膜，使其与肾实质分离；再用精细手术刀在包膜上做 2-4 mm 的切口。切口大小应根据移植物尺寸确定，但应尽量小，以维持包膜完整性。
12. 将已拉细并经火焰抛光、末端圆钝封闭的玻璃巴斯德移液管沿肾表面切线方向插入包膜下方。小心操作，轻轻撑开形成一个供移植物植入的小包膜腔，避免损伤肾实质。
13. 用精细镊子提起肾包膜切缘，利用火焰抛光的玻璃移液管将移植物插入包膜下的腔隙中。可在肾表面的包膜下植入多个移植物，并均匀分布。
14. 若在移植过程中包膜出现脱水，应滴加无菌生理盐水使其保持湿润。
15. 移植完成后，轻轻提起肌壁切口两侧，将肾脏复位回体腔内。注意观察，确保移植物未从包膜下脱出。
16. 用单针缝合（4-0，FS-2 Vicryl 缝线）关闭肌壁。可通过重新摆放小鼠体位，在对侧肾脏重复上述手术操作。
17. 使用有齿镊对齐皮肤切口边缘，用 2-3 枚外科伤口夹闭合切口。给予镇痛处理（我们采用皮下注射 5-10 mg/kg 卡洛芬），并将小鼠置于恢复笼中侧卧。使用加热灯或加热垫维持体温。密切观察直至小鼠完全苏醒，通常应在 15 分钟内完成恢复。
18. 术后 24 小时内应持续观察小鼠是否出现术后疼痛、出血和/或其他并发症迹象。定期检查手术切口是否有感染征象。
19. 术后 7-14 天使用专用外科伤口夹去除器拆除伤口夹。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
无菌手术衣	中西部兽医供应公司	350.79866.2
外科口罩	中西部兽医供应公司	350.50111.2
无菌手套	Kimberly Clark	55092
反射式伤口剪钳	F.S.T.	12031-09	与伤口夹尺寸对应
薇乔缝合线	中西部兽医供应公司	295-92100.2	4-0，FS-2，可吸收
直头尖/钝头剪刀	精细科学工具公司（F.S.T.）	14054-13
格劳费镊子（带齿、有齿、弯曲）	F.S.T.	11055-10
异氟烷蒸发器	Supera麻醉创新	VAP3000
诱导室	Supera麻醉创新	RES644
玻璃巴斯德吸管	Fisher Scientific	S67050	5" 长度
格劳费镊子（带齿、弯型）	F.S.T.	11052-10
格劳费镊子（带齿，直型）	F.S.T.	11050-10
聚维酮碘	韦伯斯特兽医	07-836-3379
无菌生理盐水	Midwest Vet Supply	193.74504.3	0.9% 氯化钠注射液
棉签	中西部兽医供应公司	001.06220.2
伤口夹	Braintree Scientific	美国化学会化学科学	可使用7 mm或9 mm的夹子
异氟烷	中西部兽医供应公司	193.33161.3
解剖显微镜	Leica	L2
小型小鼠鼻锥	Supera麻醉创新	ACC526
氧气流量计	Supera麻醉创新	OXY660
Would剪切去除剂	F.S.T.	12033-00	通用的