弹性纤维染色切片技术：观察胃癌转移的方法

摘要

来源：Lei, G. 等 pT3N0M0 胃癌组织石蜡包埋切片的弹性纤维染色。J. Vis. Exp. (2019)

在本视频中，我们演示了对胃肠道肿瘤组织切片进行弹性纤维染色的方法。该染色技术可实现对细微弹性纤维的可视化观察，有助于判断肿瘤细胞是否突破弹性膜发生浸润。

方案

所有涉及人类参与者的操作均按照机构、国家和国际的人类福利指南进行，并已通过当地机构审查委员会的审查。

1. 染色

1. 染色前，用纸巾擦去载玻片上组织周围的多余液体。
2. 将载玻片置于室温及常湿条件下，以防止在整个染色过程中组织干燥。
3. 在每张载玻片的组织上滴加少量高锰酸钾溶液，氧化5分钟。确保高锰酸钾的用量足以完全覆盖每张载玻片上的组织切片。
4. 将氧化后的载玻片放入盛有蒸馏水的考普林瓶中冲洗，换水2-3次。观察组织呈现的蓝色。
5. 随后，向载玻片上滴加少量草酸溶液，漂白5分钟。确保草酸的用量足以完全覆盖每张载玻片上的组织切片。
6. 将载玻片浸入盛有蒸馏水的考普林瓶中进行冲洗，重复2-3次。
7. 接着，将载玻片短暂浸入95%乙醇中洗涤，然后将其浸入弹性蛋白染液（5 g/L）中染色8-24小时。
   注意：弹性蛋白染液具有挥发性，且染色时间较长，因此最好将进行弹性染色的载玻片置于密封容器（如带密封盖的透明玻璃瓶）中。容器的容量和弹性蛋白染液的体积应根据浸入的载玻片数量而定，只要能完全浸没所有载玻片即可。
8. 染色后，直接将载玻片浸入95%乙醇中1-2分钟，以充分分化各组织切片。
   注意：分化是指组织切片电荷发生变化，从而去除组织吸收的多余染料，使颜色更清晰。弹性蛋白染色后不应使用蒸馏水冲洗，以免影响分化效果。必要时可在显微镜下检查，弹性纤维应呈蓝黑色，背景为灰色。组织切片宜轻微分化不足，因为后续的Van Gieson复染也会部分脱去弹性染料。
9. 分化完成后，用蒸馏水彻底冲洗载玻片。
10. 将载玻片浸入Van Gieson染液中复染1分钟。
    注意：Van Gieson染液的用量应足以完全浸没每张载玻片上的组织切片。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
弹性蛋白-范吉森染色试剂盒	Baso	BA4083B	用于弹性纤维、胶原纤维和肌纤维的染色
乙醇	LMAI Bio	LM64-17-5	100%