用于传代与运输的类球体分割：小肠神经内分泌肿瘤类球体的扩增与转移操作流程 关键词：类球体分割，传代培养，运输，小肠神经内分泌肿瘤，三维培养，类器官，肿瘤模型

摘要

来源：Ear, P. H. 等。小肠神经内分泌肿瘤类球体的建立与表征。视觉化实验杂志 (2019)

本视频展示了一种用于分割和传代由小肠神经内分泌瘤细胞生成的类球体的策略。这些类球体具有小肠神经内分泌瘤的标志物，可进行传代培养，并可用于后续抗癌药物的测试。

方案

1. 分裂SBNET类球体

注意： 此步骤用于扩增样本，并便于与其他研究人员共享。

1. 使用 P1000 移液器机械性破坏细胞外基质（ECM），并将含有 SBNET 类球体的 ECM 吸取至无菌的 1.5 mL 离心管中。
2. 在 4 °C 下以 1,000 x g  离心，完全去除上清液，并将离心管置于冰上。
3. 向沉淀中加入新 ECM 体积的 2–4 倍量。通过上下吹打 10 次将新 ECM 与旧 ECM 及 SBNET 类球体混合均匀，避免引入气泡。
4. 将 5–20 µL 的 ECM 与 SBNET 类球体混合物转移至新培养板中，使 ECM 固化。
5. 加入新鲜的 SBNET 培养基覆盖，然后将培养板放入培养箱中。回收率约为 95% 至 100%。
6. 若需将 SBNET 类球体运输至其他实验室，应将含有 SBNET 类球体的新 ECM 转移至 T25 培养瓶中，并使 ECM 完全固化。
7. 用 SBNET 类球体培养基充满 T25 培养瓶，拧紧瓶盖，并准备运输包装。
8. 收到 SBNET 类球体培养物后，移除培养基，并执行 步骤 1.1 至 1.5，以重新开始 SBNET 类球体的培养。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
DMEM	Gibco	11965-092	组织制备用培养基
DMEM/F-12	Gibco	11320-033	类器官培养用培养基
FBS	Gibco	16000044	培养基添加试剂
Glutamine	Gibco	A2916801	培养基添加试剂
Insulin	Sigma	I0516	培养基添加试剂
Matrigel	Corning	356235	用于包埋和固定 类器官的基质
Nicotinamide	Sigma	72340	培养基添加试剂
PEN/STREP	Gibco	15140-122	培养基添加试剂