1. 外泌体的切片
<ol>
	<li>通过将纯化的外泌体样本（来源于HCT116细胞的培养上清液）包埋于纯的低黏度包埋剂中，制备外泌体包埋块。</li>
	<li>使用超薄切片机对外泌体包埋块进行切片，厚度为60 nm。</li>
	<li>先用2%醋酸铀染色20分钟，再用柠檬酸铅染色10分钟。 
	配制Reynolds柠檬酸铅溶液时，将1.33 g硝酸铅和1.76 g柠檬酸钠溶于50 mL蒸馏水中。</li>
	<li>在80 kV条件下，使用透射电子显微镜观察载网。</li>
	<li>在80 kV下，于电子显微镜的CCD相机系统中点击“采集”，然后点击“文件”并选择“另存为”，并按照自动设置确定曝光时间。</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>超薄切片机</td><td>Leica</td><td>UCT</td><td></td></tr><tr><td>醋酸铀</td><td>EMS</td><td>22400</td><td>危险化学品</td></tr><tr><td>柠檬酸铅</td><td>EMS</td><td>17900</td><td></td></tr><tr><td>透射电子显微镜</td><td>Hitachi</td><td>H7600</td><td></td></tr><tr><td>镍网</td><td>EMS</td><td>G200-Ni</td><td></td></tr><tr><td>铜网</td><td>EMS</td><td>G200-Cu</td><td></td></tr><tr><td>透射电子显微镜</td><td>JEOL</td><td>JEM2200FS</td><td></td></tr></tbody></table>

包埋外泌体的切片、染色及透射电镜成像：利用透射电镜观察外泌体结构特征的实验方案

Sectioning, Staining and TEM Imaging of Embedded Exosomes: A Protocol To Visualize the Structural Features of Exosomes Using TEM

来源：Jung, M. K. 等. <a href='https://www.jove.com/video/56482' target='_blank'>外泌体透射电子显微镜样品制备与成像</a>. J. Vis. Exp. (2018)
本视频介绍了制备包埋外泌体超薄切片的技术。这些切片可进一步通过透射电子显微镜（TEM）进行染色和成像，以研究外泌体的结构特征。

来源：Jung, M. K. 等. 外泌体透射电子显微镜样品制备与成像. J. Vis. Exp. (2018)  
本视频介绍了……

外泌体是由脂质双分子层包裹的纳米级球形囊泡，其腔内含有DNA、RNA和蛋白质分子。
为了利用透射电子显微镜（TEM）观察外泌体结构，首先取外泌体包埋块——即含有包埋外泌体的固体基质块。使用超薄切片机，对外泌体包埋块进行超薄切片。
将外泌体样本收集到合适的载网上，并使其附着于表面。载网可为外泌体样本在后续染色步骤中提供稳定的支撑。
接下来，将载网置于一滴醋酸铀（一种重金属染色剂）上，孵育所需时间。铀离子会与外泌体中存在的脂质、蛋白质、DNA 和 RNA 相互作用。
随后用柠檬酸铅对外泌体切片进行染色，柠檬酸铅也可与外泌体的生物分子结合。柠檬酸铅与先前结合的醋酸铀酰离子发生弱结合，从而在成像过程中增强与背景的对比度。
使用透射电子显微镜（TEM）观察双重染色的外泌体。TEM将电子束聚焦于外泌体样本上。与未染色区域相比，外泌体中的染色区域对电子的散射更强。
物镜光阑会过滤这些高度散射的电子。因此，含有染色生物分子的外泌体比背景更暗。

使用超薄切片机制备厚度为60纳米的切片。将切片置于镍网上，并用2%醋酸铀染色20分钟，随后用柠檬酸铅染色10分钟，对部分切片进行双重染色。接着，将染色后的切片放入透射电子显微镜中，以80 kV电压观察样品，并根据曝光时间的自动设置进行操作。在观察到外泌体图像后，使用显微镜的软件采集并保存图像。

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嵌入外泌体的切片、染色和 TEM 成像:使用 TEM 可视化外泌体结构特征的方案

3.8K 次观看. 外泌体是纳米大小的球形囊泡，由脂质双层包围，其中含有存在于管腔内的 DNA、RNA 和蛋白质分子。 要使用透射电子显微镜 （TEM） 可视化外泌体结构，首先取一个外泌体块 - 包含嵌入外泌体的固体基质块。使用超切片机，获得外泌体块的超薄切片。 将外泌体切片收集在合适的网格上，并使其粘附在表面上。网格为外泌体标本提供稳定的支撑，以进行后续染色步骤...

包埋外泌体的切片、染色及透射电镜成像：利用透射电镜观察外泌体结构特征的实验方案

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姓名	公司	目录编号	评论
超薄切片机	Leica	UCT
醋酸铀	EMS	22400	危险化学品
柠檬酸铅	EMS	17900
透射电子显微镜	Hitachi	H7600
镍网	EMS	G200-Ni
铜网	EMS	G200-Cu
透射电子显微镜	JEOL	JEM2200FS