外泌体切片的金免疫染色:一种在外泌体腔中可视化诊断标志物的技术

摘要

来源:Jung， MK， Mun， JY 通过透射电子显微镜对外泌体进行样品制备和成像。J. Vis. Exp. （2018）

在本视频中，我们演示了位于超薄外泌体切片管腔区域内的生物标志物的金免疫染色。该技术通过可视化患病细胞分泌的外泌体内的靶分子来实现疾病的早期诊断。

方案

1. 外泌体切片的免疫染色和成像

1. 使用超薄切片机制备外泌体块的 60 nm 超薄切片，并将它们收集在镍网格上。
2. 将网格在 50 μL 滴 0.02 M 甘氨酸中孵育 10 分钟，以淬灭游离醛基。
3. 在 100 μL DW 中冲洗 3 次，每次 10 分钟。在室温下在含有 1% BSA 的 PBS 中孵育 1 小时。
4. 将网格在 50-100 μL 抗 KRS 抗体（1:100 在含有 0.1% BSA 的 PBS 中）中孵育 1 小时（如有必要，此步骤应在 4 °C 下过夜。
5. 用 5 滴含 0.1% BSA 的 PBS 洗涤网格 （50 μL），每滴 10 分钟。
6. 将网格转移到二抗滴中 1 小时（在含有 0.1% BSA 的 PBS 中将抗兔 IgG 偶联到 10 nm 金颗粒 （1:100））。
7. 每 10 分钟用 5 滴含 0.1% BSA 的 PBS 单独滴 （50 μL） 洗涤网格。
8. 在黑暗条件下用 2% 乙酸铀酰双染 20 分钟，分别用雷诺柠檬酸铅双染 10 分钟。
9. 在 80 kV 的透射电子显微镜下观察网格。
10. 单击 "Acquire"，然后在 80 kV TEM 下的 CCD 相机系统中单击 "File" 和 "Save as"。曝光时间遵循自动设置。

材料