纯化外泌体的负染色法：利用透射电子显微镜观察外泌体形态的实验步骤 关键词：外泌体，负染色，透射电子显微镜，形态学，纯化，纳米囊泡

摘要

来源：Jung, M. K. 等. 外泌体透射电子显微镜样品制备与成像. J. Vis. Exp. (2018)

本视频介绍了一种对纯化外泌体进行负染色的实验方法。通过透射电子显微镜对外泌体负染样品进行成像，该技术有助于观察外泌体的形态特征。

方案

1. 负染色法

1. 使用电晕放电仪对覆有薄层火棉胶/碳膜的200目铜质透射电镜载网进行1分钟的电晕放电处理。
2. 用1 mL的2%多聚甲醛（PFA）固定纯化的外泌体，孵育5分钟。
   注意：多聚甲醛蒸气具有毒性，所有操作均应在通风良好的通风橱中进行。
3. 将5–7 µL外泌体悬液滴加到载网上，孵育1分钟。若外泌体浓度过高，可将其稀释至原浓度的二分之一至五分之一。
4. 用注射器将约20滴过滤后的1%醋酸铀酰（UA）染色液滴加至电镜载网表面，立即进行染色。
5. 用滤纸接触载网边缘，吸除载网上的多余UA溶液。
6. 用一滴水快速冲洗载网，以去除残留的染色液。
7. 用镊子夹持载网并放置于桌面上，再用培养皿部分覆盖载网，于室温下干燥10分钟。
8. 将载网存放于电镜载网盒中，以备后续在80 kV条件下进行透射电镜观察。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
醋酸铀酰	EMS	22400	危险化学品
透射电子显微镜	JEOL	JEM2200FS
辉光放电器	JEOL	JFC1100E
多聚甲醛	EMS	19210
Formvar碳支持膜铜 网格（200目）	EMS	FCF200-CU
Formvar碳支持膜镍 网格（200目）	EMS	FCF200-NI