小鼠垂直袖状胃切除术：实验小鼠模型中缩小胃容积的外科手术方法

摘要

来源：Garibay, D., Cummings, B. P. 一种小鼠垂直袖状胃切除术模型。J. Vis. Exp. (2017)

在本视频中，对实验小鼠模型进行了垂直袖状胃切除术。该手术可沿胃的大弯侧切除大部分胃组织。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 垂直袖状胃切除术与假手术操作

1. 手术当天，称量小鼠以获得基线体重数据。
2. 手术室应配备麻醉系统、恒温水浴和加热垫。将水浴温度设定为 37 °C，用于预热 0.9% 生理盐水以备灌洗使用。用 70% 乙醇清洁手术区域，并采用无菌技术打开已灭菌的手术包和器械。
   注意：加热垫用于在手术期间及麻醉恢复过程中维持动物体温。
3. 使用诱导舱以 5% 异氟烷和 1 L/min 的 O₂ 气流对小鼠进行麻醉。通过脚趾夹捏测试确认小鼠已达到适当的麻醉深度。一旦麻醉状态稳定，维持麻醉使用 1–3% 异氟烷和 0.6 L/min 的 O₂ 气流。
4. 小鼠麻醉后，在其眼睛上涂抹眼膏（参见 材料表）以保持术中角膜湿润。同时给予镇痛药，如美洛昔康（2 mg/kg，皮下注射）。从脐部至腋窝区域剪除毛发，操作时轻拉皮肤以提供适当张力。
   1. 由于小鼠皮肤薄而脆弱，剪毛时需小心避免造成皮肤损伤。使用聚维酮碘和酒精清洁皮肤。
   2. 佩戴无菌手套，准备无菌手术区域及器械。采用无菌操作技术进行后续步骤。通过在小鼠两侧铺设无菌手术巾来建立无菌手术区域。使用已灭菌的锡箔纸为小鼠制作手术巾。
   3. 在锡箔纸上剪开一个小孔，以便接触小鼠腹部。
5. 使用虹膜剪从腹部中线（脐部）至剑突软骨水平切开皮肤。辨认腹白线，并沿腹白线用虹膜剪剪开腹壁。使用组织钳（CTAs）轻柔地将胃从腹腔中抬起，然后钝性分离胃大弯侧的大网膜。
6. 使用 7-0 单股可吸收缝线（带圆锥形针头）打两个结，结扎位于胃底与脾脏之间走行的胃短动脉。使用弹簧剪在两个结扎线之间剪断血管。血管离断后，将胃完全外置于腹腔外。在胃下方放置纱布并用生理盐水润湿，以保持组织湿润。
7. 进行垂直袖状胃切除术（VSG）时，使用 7-0 单股可吸收缝线（带圆锥形针头）以三重结方式结扎胃动脉和静脉的主要分支。结扎位置应位于预定切开线稍下方（即靠近胃小弯侧）。
   注意：预定切开线起始于胃贲门切迹上方约 2 mm 处（即朝向胃大弯侧），并至少位于角切迹（margo pilcatus）下方 2 mm，延伸至胰腺右叶近端。通常每侧胃壁有 4 条血管需要结扎，但不同小鼠之间可能存在差异。
   1. 为防止胃切除过程中胃内容物溢出，使用 6-0 单股可吸收缝线（带圆锥形针头）在预定切开线稍下方穿过两侧胃壁，采用连续单纯缝合方式缝合一线。缝合起始于食管右侧、角切迹下方，终止于胰腺上方。
   2. 在缝合线近端放置细尖止血钳，使用弹簧剪在缝合线与止血钳之间剪开。将切除的胃组织移出无菌手术区域。使用组织钳（CTAs）清除胃表面的血液和消化物。
   3. 使用 6-0 单股可吸收缝线（带圆锥形针头）以间断单纯缝合方式加强胃壁对合。
      注意：推荐使用间断单纯缝合，因其闭合更牢固，优于连续单纯缝合。
   4. 在整个手术过程中，用生理盐水反复冲洗残余胃组织，以保持组织湿润和清洁。使用连接 20 mL 注射器的 20G 灌胃针进行生理盐水胃腔冲洗。选用此规格可确保提供足够压力，同时避免因压力过高或使用普通尖头针导致胃组织损伤。
   5. 至少打 20 个结以牢固闭合胃腔；特别注意食管侧的闭合，因该部位较难操作，常成为裂开的高发区域。
   6. 使用组织钳（CTAs）轻压胃部，检查是否存在渗漏。如发现渗漏，应在渗漏部位追加间断单纯缝合结，并再次进行渗漏测试。重复测试直至无渗漏。
   7. 使用至少 60 mL 生理盐水对残余胃进行最终彻底冲洗，确保无任何感染性颗粒残留。
8. 使用组织钳（CTAs）将胃复位于肝脏下方的腹腔内。将组织钳置于腹腔背侧以吸收多余液体。使用钝头 18G 针头，在关闭腹腔前直接向腹腔内注射乳酸林格液（LRS），可选择性加入抗生素（0.5 mL LRS ± 20 mg/kg 恩诺沙星）。
   注意：此举可补充术中液体丢失，并通过局部给药方式直接将抗生素输送至手术部位，促进术后恢复。
9. 使用 6-0 单股可吸收缝线（带圆锥形针头）以间断单纯缝合方式闭合腹肌层。随后使用 6-0 单股可吸收缝线以连续单纯缝合方式闭合皮肤层。
10. 在皮肤表面涂抹组织粘合剂，并将皮肤折叠覆盖缝合线，以埋藏缝线，防止小鼠术后自行破坏伤口闭合。
11. 关闭异氟烷气源，将小鼠留在加热垫上恢复 10–15 分钟后再放回其饲养笼。在小鼠恢复意识并能自主活动前，不得无人看护。
12. 术后应将动物单独饲养直至完全恢复。
    注意：若研究过程中需准确测量摄食量，则小鼠在整个实验期间均应单独饲养。存在误食笼内垫料导致异物阻塞的风险。除提供丰富化环境的筑巢材料外，动物应饲养在无垫料的笼具中（参见 材料表）。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
6-0 缝合线	Ethicon	Z432	单丝可吸收/锥形
7-0 缝合线	Covidien	8866127-01	单丝可吸收/锥形
棉签	Fisherbrand	23-400-118	小型
棉签	Fisherbrand	233-400-101	大型
铝箔	Various
手术铺巾	Various
0.9% 生理盐水溶液	Various
微针驱动器	Fine Science Tools	12075-14
弹簧剪刀	Fine Science Tools	15396-00
酒精	Various
眼膏	Paralube®Vet Ointment	17033-211-38
美洛昔康（Metacam）	Boehringer Ingelheim	141-213	5 mg/ml
细尖止血钳	Fine Science Tools	13021-12
20 mL 注射器	Various
恩诺沙星	Baytril	08713254-186599	22.7 mg/ml