后肢骨骼肌提取：从小鼠模型中切除后肢骨骼肌的操作流程

摘要

来源：Bonetto, A. 等. 结肠-26 癌移植小鼠模型在癌症恶病质研究中的应用. J. Vis. Exp. (2016)

在本视频中，我们介绍了从小鼠模型中分离后肢骨骼肌的操作步骤。分离得到的肌肉可在低温条件下保存，以待后续下游分析。 

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医评审委员会的审核。

1. 组织和器官切除

注意：若需将组织用于生物化学或分子生物学检测，应计划称量每个器官和组织，并立即将组织片段放入预先标记的冻存管中。在液氮中速冻后，于 -80 °C 保存。

1. 为避免组织样本被毛发污染，用70%乙醇喷洒整个动物体表。
2. 将小鼠仰卧置于解剖板上，并通过将足部固定在升高的滴定管夹上，使一个肢体垂直伸展。
3. 用Dumont镊子夹住下肢皮肤，使用弯头精细剪刀轻轻去除皮肤和筋膜，暴露下肢深层的肌腹。
4. 通过腓肠肌在股骨后侧的外侧和内侧髁处的起始点以及通过跟腱止于跟骨的位置，辨认后肢后侧的腓肠肌。
   1. 接着切断腓肠肌的跟腱。用Dumont镊子夹住腓肠肌远端，将肌腹向其起点方向牵拉。使用剪刀尽可能靠近股骨处切断肌肉起点。将肌肉放入培养皿中，立即称重，并置于液氮中速冻保存。
      注意：务必避免将比目鱼肌与腓肠肌一同切除。若发生此情况，应使用镊子轻轻将其剥离，小心去除比目鱼肌。
5. 接着辨认胫骨前肌，其起始于胫骨前外侧面，通过远端肌腱止于内侧楔骨，并将其完整切除。
   1. 为获得操作杠杆力，用拇指和食指夹住足趾固定足部。将Dumont镊子尖端插入胫骨前肌表层远端肌腱下方，并移动镊子，利用其钝端将胫骨前肌肌腹从下方结缔组织上分离。
   2. 使用精细弯剪切断远端肌腱，然后尽可能靠近胫骨处切断肌肉起点。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
CD2F1 小鼠	Harlan	60
麻醉装置	EZ-Anesthesia	EZ-7000
OCT 包埋剂	Tissue-Tek	4583
冷冻切片机	Leica	CM1850
软木圆盘	Electron Microscopy Sciences	63305
微量离心管	BD	365873
Superfrost plus 载玻片	VWR	48311-703
链霉素-青霉素	Cellgro	30-002-CI