小鼠肠道全组织制备：利用简易肠道切开装置制备全组织标本

摘要

来源：Yoneda, M. 等. 一种快速制备小鼠肠道全装片的简易装置. J. Vis. Exp. (2015)

在本视频中，我们演示了使用一种简单的肠道切开装置对小鼠肠道进行整体封片制备的方法。所获得的组织封片质量优良且均一，可用于组织学分析。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 装置

1. 如本文所述，从一整块高密度聚甲醛树脂实心块上加工出装置底座的主要部分。在两端各制作3 mm高的凸起条，并在这些凸起条上加工出2.5 mm深的凹槽以容纳杆件（见图1和图2）。
2. 使用直径为2.4 mm、端部为圆角的不锈钢材料制作杆件。
注意：盖子的主框架由硬铝板加工而成。

2. 设备的使用

1. 使用剪刀和戴手套的手指从小鼠腹腔中解剖出小肠和结肠。用弯头镊子夹住肠系膜，并轻轻将其从小肠上剥离。
2. 使用已将宽端剪短的Gilson型移液器吸头，以冰冷的磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）冲洗肠道，该吸头可适配10或20 mL鲁尔接头塑料注射器。
3. 将小肠（SB）平铺在一张纸巾上，用剪刀将其沿长度均分为三段（近端、中段和远端——SB1、SB2和SB3）。去除盲肠，并将结肠平铺开。
4. 用剪刀在肠段上做数个微小切口，以便液体流出；将一张纸巾覆盖在肠道上，轻轻用手指按压组织以挤出液体并吸干。
5. 提起各肠段，插入先前已在盛有磷酸盐缓冲液的烧杯中浸湿的不锈钢棒。
   注意： 如有需要，可将肠段翻转（内翻）。
6. 用铅笔在裁剪成合适大小的卡片或滤纸上标注标签，因铅笔字迹几乎不受任何溶液影响。建议标注尸检日期、实验编号及动物识别编号。
7. 将标注好的卡片或滤纸放入装置底座中。将金属棒和肠段插入底座的插槽内，确保各肠段近端以标准化方式定位，近端应靠近卡片上的标签。
8. 将装置的上部部件盖在底座上，利用倾斜的导槽引导手术刀片沿纵向切割肠段。
   注意： 切割时用手指轻轻固定组织，有助于防止其随刀片移动。
9. 取下装置的上部部件，小心取出滤纸及附着其上的组织（仍带金属棒）。
   注意： 在滤纸下方放置一张硬卡纸有助于提升整体结构。
10. 用PBS浸湿的手套指尖轻微润湿肠段，左右滚动金属棒以打开肠道并将其展平。组织将随之牢固贴附于滤纸上。
11. 肉眼检查各制备样本是否存在明显病变。
12. 将附着于滤纸上的组织转移至含有固定液的浅浴槽（或三明治盒）中。
    注意： 组织一旦贴附于滤纸或卡片，即可牢固固定。可使用多种固定液保存样本。若研究肠道细胞增殖，推荐使用Carnoy固定液，因其是目前细胞增殖检测方法中最理想的固定方式；但若检测其他终点指标，也可使用福尔马林或其他固定液。
13. 固定完成后（通常为3小时），将样本转移至70%乙醇中，可长期保存直至后续使用。制备样本可用于表面观察（en face）和/或制备组织学切片，进行H&E染色或其他组织学染色、免疫组织化学和/或原位杂交分析。
    注意： 过度固定可能降低免疫组织化学或原位杂交的反应性。聚丙烯材质的三明治盒非常适合大量样本的储存。
14. 如需进一步处理，可将来自不同肠段的固定组织制成“瑞士卷”（Swiss rolls），并采用包括上述在内的各种组织学染色方法进行染色。制作“瑞士卷”时，需将肠段从滤纸上取下，围绕牙签或鸡尾酒签卷起，用昆虫针固定后进行石蜡包埋处理。
15. 如需观察异常隐窝病灶，可用亚甲蓝对大块组织进行染色。
16. 可从容地对固定后的样本进行评分分析。

结果

图1. 原始装置的照片。 原始装置由多个手工制备的金属部件组装而成。(A) 组装完成的装置。(B) 移除装置顶部以显示处于正确位置的金属杆。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Delrin	Ryan Plastics, Earls Barton, UK		高密度缩醛树脂，类似材料亦可满足要求
Duralumin 板材	Metal Supplies Ltd, Park Road, Dukinfield. SK16 5LP UK		一种始于1909年的铝合金，可由其他供应商提供 
已制备完成、可直接使用的装置	请联系 Goodlad 博士  r.goodlad@imperial.ac.uk		如需了解供应详情，请联系 r.goodlad@imperial.ac.uk