胃底腺体分离：一种从人胃组织中分离胃底腺体的方法

摘要

来源：Teal, E. 等. 用于研究再生的鼠源和人源原代胃上皮单层培养。J. Vis. Exp. (2018)

本视频介绍了一种从人胃底组织中分离胃上皮细胞的方法。所分离的上皮细胞可作为体外模型，用于研究其在胃生理学和病理生理学中的调控作用。

方案

所有涉及人类参与者的操作均按照机构、国家和国际的人类福利指南进行，并已通过当地机构审查委员会的审查。

1. 建立人源三维胃底类器官

注意：为避免污染，整个实验步骤均需在无菌细胞培养罩内进行。人胃底组织来自接受袖状胃切除术的患者。

1. 从接受袖状胃切除术的患者中采集组织，置于冰上预冷的含钙溶液中²⁺/毫克²⁺无钙镁杜氏磷酸盐缓冲液（DPBS）置于大型塑料容器中。
2. 使用镊子在含有 100 mL Ca 的无菌烧杯中剧烈清洗组织²⁺/毫克²⁺无钙镁DPBS洗涤约30秒，或直至去除碎片和血液。随后，使用无菌纱布轻轻擦去上皮表面的黏液层。
3. 使用大号镊子牢固夹住组织的肌层，并用大号弯止血钳用力刮除上皮层。将刮下的上皮碎片收集至无菌的聚苯乙烯培养皿中。
4. 将上皮组织切成约 2.0 x 2.0 mm 的小块² 使用剃刀将组织切成大小均匀的片段，以优化组织消化效果。用含钙离子的溶液洗涤组织片段²⁺/毫克²⁺ 无DBPS培养基，添加抗生素（Ca²⁺/毫克²⁺ 无钙镁DPBS，1%青霉素/链霉素，0.25 mg/....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
无 Ca2+/Mg2+ 的 DPBS	Fisher	21-031CV
无菌纱布
弯止血钳
无菌培养皿
无菌剃刀刀片
高级杜尔贝科改良伊格尔/ F12 培养基（基础培养基）	Life Technologies	12634-010
青霉素/链霉素	Thermo Scientific	SV30010
两性霉素 B/庆大霉素	Thermo Scientific	R01510
GlutaMAX（L-谷氨酰胺）	Life Technologies	25030-081
卡那霉素	Thermo Fisher	RO1510
Ⅰ型胶原酶	Worthington	LS004214
牛血清白蛋白	Sigma Aldrich	A9418
HEPES 缓冲液	Sigma Aldrich	H0887
125 mL 圆底烧瓶
1 英寸（25 mm）搅拌子
橡胶隔垫
长度为 3.5 英寸的 20G 脊髓穿刺针	Thermo Fisher	405182
Kimwipes（纸巾）	Fischer Scientific	06-666C
带橡胶软管的氧气瓶
铁架台夹具
37 °C 水浴锅
5 mL 细胞培养试管	Fisher	14-956-3C