小鼠模型中癌细胞的黏膜内接种：建立头颈部原位癌小鼠模型的操作步骤 关键词：原位癌模型，头颈部癌，小鼠，黏膜内接种，癌细胞移植

摘要

来源：Oweida, A. J. 等. 小鼠鳞状细胞癌细胞的黏膜内接种用于肿瘤免疫谱分析及治疗反应评估。J. Vis. Exp. (2019)

在本视频中，我们通过鳞状细胞癌细胞系的黏膜内接种，建立一种头颈部癌症的原位小鼠模型  。该荷瘤小鼠表现出与人类疾病临床相关症状相似的特征，因此可用于研究癌症进展并探索新的治疗策略。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 小鼠细胞注射

1. 制备细胞与基底膜基质的1:1混合物（各50 µL）。
2. 先加入细胞，然后逐渐用移液器加入基底膜基质。避免引入气泡。确保在动物注射前立即配制混合物。若将细胞长时间置于基底膜基质中，会导致细胞在基质混合物中沉降，从而难以充分剧烈震荡，这将导致小鼠间肿瘤大小出现显著差异。
3. 轻柔混匀。所有涉及基质的操作均需在冰上进行。基底膜基质在室温下会聚合。
4. 准备用于接种的注射器。
5. 用100 µL细胞/基底膜基质溶液填充0.5 mL胰岛素注射器（23G）。
6. 将注射器置于冰上，以防止基底膜基质发生聚合。
7. 将小鼠放入含异氟烷和氧气（2.5%）的麻醉舱中进行麻醉。
8. 在注射前确认小鼠已深度麻醉（通过脚趾夹捏无反应来判断）。
9. 将针头插入右侧或左侧颊部。操作时通过口腔两侧的开放空间进行。
10. 确保小鼠舌头不在针头路径上。
    注意： 容易刺伤舌头，从而导致舌部肿瘤。如有必要，将舌头移至对侧。
11. 在口腔内操作时，保持注射器与颊部平行。
12. 准备注射时，先将注射器稍向后拉，然后以10°角缓慢插入。
13. 在5秒内注入100 µL细胞/基底膜基质悬浮液。
14. 注射完成后保持注射器原位5秒，以确保所有物质完全注入。
    注意： 对于对照组非荷瘤小鼠，注射无血清培养基与基质的混合物（如上所述），但不含肿瘤细胞。
15. 轻柔地拔出注射器。
16. 对剩余小鼠继续执行上述操作。
17. 等待约1周，直至肿瘤明显出现（B4B8和LY2细胞的肿瘤体积约为50–200 mm³ ）。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
HBSS	ThermoFisher Scientific	14175079	不含钙、不含镁、不含酚红
Helois 质谱流式细胞仪	Fluidigm	NA
Matrigel 基质膜	Corning	CB-40234B