鸡胚尿囊膜收获：一种从鸡蛋中分离携带肿瘤移植物的尿囊膜的方法

摘要

来源：Schmidt, L. B. 等. 利用鸡胚尿囊绒毛膜体内模型评估头颈部癌症中的神经周围浸润。J. Vis. Exp. (2019)

本视频展示了从鸡胚中分离带瘤的尿囊绒毛膜。所获得的CAM可用于后续下游应用。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 收集 CAM

1. 用 pH 7.0 的 4% 多聚甲醛（PFA）准备 6 孔板，每枚卵使用一孔，每孔加入 2 mL。
2. 将卵移至实验台。使用连接在注射器上的针头穿刺薄膜敷料，在绒毛尿囊膜（CAM）上滴加约 300 µL 多聚甲醛，使 CAM 稍微硬化，从而便于后续收获操作。对所有卵重复此步骤。
3. 用剪刀移除上半部分蛋壳（即操作窗所在位置），保留附着其上的绒毛尿囊膜（CAM）（图 1I）。将该半片蛋壳修剪至直径约 3 cm。用精细镊子夹住 CAM，将其从蛋壳上剥离并放入多聚甲醛中。

结果

图1：DRG移植、细胞接种及CAM收获：第8天：A。去除石蜡膜后可清晰观察到CAM。B-C。用精细镊子将DRG放置于CAM上。D。鸡蛋覆盖薄膜敷料后放入培养箱；箭头指示被覆盖的开口处。第10天：E-F。移除薄膜敷料并定位DRG（F图中箭头所示）。G-H。在距离DRG约2 mm处向CAM滴加5 µL细胞悬液。第17天：I-L 和 M-P 展示了两种不同的CAM收获方法。I。用精细剪刀从气室钻孔处开...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
多聚甲醛（PFA）溶液	Sigma-Aldrich	# P6148-1KG	用水稀释配制成4% PFA溶液
精细外科直头锐利剪刀	Fine Science Tools (FST)	#14060-09	用于第17天收获CAM组织
受精的洛曼白来航鸡蛋			早期受精日的受精卵，最好为受精后第一天。本实验所用鸡蛋来自密歇根州立大学家禽场
超精细直头格雷夫镊子 	Fine Science Tools (FST)	 # 11150-10 	用于第8天将DRG移植到CAM上，以及第17天收获CAM组织