使用miRNA抑制剂模拟肿瘤内治疗：一种在小鼠模型中分析miRNA抑制剂对肿瘤生长影响的方法

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摘要

来源：Ramirez-Moya, J. 等. 体内抑制微小RNA以减少小鼠肿瘤生长。J. Vis. Exp. (2019)

本视频展示了在原位小鼠模型中将miRNA抑制剂作为抗肿瘤生长治疗剂的体内递送方法。通过瘤内注射合成的miRNA抑制剂（antagomiR），可使其结合并抑制内源性miRNA，从而导致mRNA上调并抑制肿瘤生长。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 细胞 flank 接种及瘤内 antagomiR 治疗

细胞准备
1. 构建Cal62人甲状腺癌细胞系（携带KRASG12R和p53A161D突变），使其过表达一种可组成型表达GFP和荧光素酶的转基因构建体（CMV-萤火虫荧光素酶-IRES-eGFP）。通过抗生素抗性筛选或流式细胞术分选GFP阳性细胞，获得稳定转染的细胞。
2. 将细胞培养于添加青霉素、链霉素和10%胎牛血清（FBS）的杜尔贝科改良伊格尔培养基（DMEM）中，置于37 °C、5% CO₂条件下培养。
3. 将1 × 10⁶个细胞悬浮于50 μL、4 °C的磷酸盐缓冲液（PBS）中。
将细胞接种至小鼠侧 flank 区域
1. 将细胞与等体积的基底膜基质混合。例如，将50 μL PBS中的1 × 10⁶个细胞加入50 μL基底膜基质中（参见材料表），并轻轻混匀。
2. 使用1 mL胰岛素注射器配合27G 1/2''（0.4×13 mm）针头，将100 μL样品（PBS中的细胞+基底膜基质）皮下注射至6周龄免疫缺陷型BALB/c

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材料

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