将甲状腺癌细胞原位接种至小鼠甲状腺：建立原位甲状腺癌小鼠模型的操作流程

摘要

来源：Julia Ramirez-Moya，等。体内抑制微小RNA以减少小鼠肿瘤生长。J. Vis. Exp. (2019)

本视频介绍了将甲状腺癌细胞原位接种至小鼠模型甲状腺内的操作步骤，该模型可作为评估癌变过程及探索潜在治疗策略的重要平台。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 甲状腺原位细胞接种

1. 细胞制备
   1. 构建Cal62人甲状腺癌细胞系，使其过表达一种组成型表达GFP和荧光素酶的转基因载体。通过抗生素抗性筛选或流式细胞术分选GFP阳性细胞，以获得转基因细胞。
   2. 在添加抗生素（青霉素和链霉素）及10% FBS的DMEM培养基中，于37 °C、5% CO₂条件下培养这些细胞。₂.
   3. 将 1 × 10⁶ 细胞重悬于⁵ 5 μL PBS 中的细胞
2. 小鼠甲状腺细胞接种
   1. 向7周龄BALB/c小鼠皮下注射100 μL镇痛剂（buprenorphine）和100 μL抗生素（cephalosporin） nu/nu 小鼠 用酒精对注射部位进行消毒。
   2. 向小鼠甲状腺内注射5 μL细胞悬液。
      1. 使用3%异氟烷与氧气混合麻醉小鼠，并将其置于无菌通风柜内的体视显微镜下。通过足底反射（用力捏压脚趾）评估麻醉深度，并根据需要调整麻醉剂输送，以维持手术所需的麻醉水平。
      2. 双眼涂抹眼药膏以防止干燥。 
      3. 对每只小鼠，用碘伏消毒颈部，并用剪刀在皮肤上做一个约2 cm的切口。切开后，移开唾液腺以暴露颈部。
      4. 使用解剖镊和/或剪刀解剖带状肌，暴露气管和甲状腺。用10 μL注射器将5 μL细胞悬液注射至位于环状软骨侧面的右侧甲状腺叶。
      5. 重新定位唾液腺，并使用编织涂覆的非吸收性丝线缝合切口。
      6. 将碘伏加入伤口区域，并将小鼠置于加热毯上，使其从麻醉中恢复。
   3. 术后次日，皮下注射镇痛剂（丁丙诺啡），并在250 mL饮用水中加入3 mL液体布洛芬（40 mg/mL），持续1周。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
基底膜基质：Matrigel 基底膜基质高浓度	Corning	#354248
体内 递送试剂：Invivofectamine 3.0 试剂	Thermo Fisher	IVF3005
体内 成像软件：IVIS-Lumina II 成像系统	Caliper Life Sciences