细胞外基质悬液制备：一种从组织来源的细胞外基质获得均一悬液的技术

摘要

来源：Kornmuller, A. 等。利用细胞外基质制备组织特异性泡沫材料和微载体作为细胞培养与递送平台。J. Vis. Exp. (2017)

本视频介绍了从脱细胞化并冻干的组织中制备均质化且经消化的细胞外基质悬浮液的方法。该技术有助于制备来源于细胞外基质的多孔泡沫和微载体，可用于构建先进的三维细胞培养模型的基质。

方案

1. 脱细胞组织处理

1. 脱细胞化与冷冻干燥
   1. 按照既定方案对目标组织进行脱细胞化处理。
      注意：本研究中的支架是依据已发表的人源脱细胞脂肪组织（DAT）、猪源脱细胞真皮组织（DDT）和猪源脱细胞左心室组织（DLV）的脱细胞化方案制备的。也可使用市售的不溶性胶原蛋白来制备泡沫或多孔微载体，例如来源于牛跟腱的胶原蛋白，在10–50 mg/mL浓度范围内已成功应用。其他来源的不溶性胶原蛋白也可使用，但可能需要优化以确定可形成稳定支架的浓度范围。
   2. 用镊子将水合状态的脱细胞组织或纯化胶原转移至50 mL离心管中，并加入足量的双蒸水（ddH₂O）浸没组织，总体积最多为35 mL。
   3. 将样品在-80 °C下冷冻过夜，离心管应水平放置，以最大化后续冷冻干燥过程中升华的表面积。
   4. 取下离心管盖，将冻结的样品转移至冷冻干燥瓶中。
   5. 使用实验室冷冻干燥机对样品冷冻干燥48–72小时，或直至完全干燥。
      注意：干燥时间可能因不同的冷冻干燥设备和脱细胞组织类型而异。
   6. 使用锋利的手术剪将冻干的细胞外基质（ECM）精细剪切成小块（约1–2 mm³）。
   7. 将剪碎的ECM储存于干燥器中，待后续处理时使用。
      

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
冰醋酸	BioShop	ACE222.5
αα-淀粉酶	Sigma	101074694	来自米曲霉
离心	赛默飞世尔科技	75004251	配有可摆动桶式转子，适用于15 &和 50 mL 离心管
离心管（15 mL）	Sarstedt	62.554.205
干燥器	Fisher Scientific	8624426	用于冻干 ECM 和生物支架的储存
双蒸水（ddH₂O）			来自 Barnstead GenPure xCAD 水纯化系统
细胞外基质（ECM）			从人脂肪组织、猪真皮或猪心肌中分离，如 Flynn 等 2010、Reing 等 2010 和 Wainwright 等 2010（参考文献 #28、8、32）所述
手持式匀浆器	Fisher Scientific	14-359-251	转速：8,000 - 30,000 rpm
匀浆器配件：锯齿形底部发生器探头	Fisher Scientific	14-261-17	10 x 95 毫米
液氮
氯化钠	BioShop	7647-14-5
磷酸二氢钠	BioShop	10049-21-5
手术剪	VWR	82027-590