通过冷冻干燥法由细胞外基质制备泡沫材料：一种利用脱细胞组织细胞外基质生成生物支架的方案 细胞外基质，脱细胞组织，生物支架，冷冻干燥，组织工程，泡沫材料

摘要

来源：Kornmuller, A. 等. 制备细胞外基质来源的泡沫材料与微载体作为组织特异性细胞培养及递送平台. J. Vis. Exp. (2017)

本视频介绍了合成纯细胞外基质（ECM）来源泡沫的方法，无需使用化学交联。这些来源于细胞外基质的泡沫可应用于先进的体外三维细胞培养模型，或作为促再生生物支架。

方案

1. 细胞外基质衍生泡沫材料的制备

1. 将 ECM 细粉分散于缓冲溶液中，制备均一的 ECM 悬液，并在 37 °C、120 rpm 持续振荡条件下孵育，直至悬液升温。
2. 用 0.2 M 乙酸将 ECM 悬液稀释至所需浓度。
   注意：根据 ECM 来源的不同，可制备浓度范围为 10–100 mg/mL 的稳定泡沫，其中 DAT、DDT 和 DLV 推荐使用 15–50 mg/mL 的浓度范围。通常，较高浓度下制备的泡沫孔隙略小，但在培养中更稳定，且更易于操作。
3. 使用带有 18G 针头的 3 mL 注射器，以防止 ECM 悬液中产生气泡，将 ECM 悬液注入所需模具中。为制备 DAT、DDT 和 DLV 泡沫，向经细胞培养处理的 48 孔板中每孔加入 400 μL 浓度为 35 mg/mL 的 ECM 悬液。
   注意：所选模具的形状和 ECM 悬液的体积将决定最终泡沫的几何结构。
4. 盖好模具，并将其置于 -20 °C 或 -80 °C 冰箱中过夜冷冻。
   注意：冷冻温度可能影响泡沫的孔隙率。与 -80 °C 相比，在 -20 °C 下冷冻样品会形成更大的冰晶，从而产生更大的孔径。为制备具有均匀多孔结构的泡沫，应确保模具不接触导热表面，以避免定向冷却。
5. 将含有冷冻样品的模....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
分析天平	Sartorius	CPA225D
离心管（15 mL）	Sarstedt	62.554.205
离心管（50 mL）	Sarstedt	62.547.205
牛跟腱来源的胶原蛋白 肌腱（不溶性）	Sigma	C9879	或类似的不溶性胶原蛋白 来源；可用作 脱细胞的替代方法 用于制备泡沫的组织 微载体
干燥器	Fisher Scientific	8624426	对于冻干的ECM和 生物支架储存
杜瓦瓶	Fisher Scientific	10-196-6	低型；体积范围为 250–500 mL
双蒸水（ddH_{2}O）			来自 Barnstead GenPure xCAD 水纯化系统
D-PBS（磷酸盐缓冲液） 生理盐水	Wisent	311425125
细胞外基质（ECM）			源自人脂肪组织 组织，猪皮或猪 心肌，如Flynn所述 等 2010，Reing 等 2010，以及 Wainwright 等，2010（参考文献 #28、8） 32)
镊子	VWR	37-501-32	用于转移泡沫
冷冻机（-20 °C） °C)	VWR	97043-346
冷冻机（-80 °C）	Thermo Scientific	EXF40086A
玻璃小瓶	Fisher Scientific	03-339-26D	储存冻干后经低温研磨的样品 细胞外基质
液氮			用于电喷雾
冻干机	Labconco	7750021	FreeZone4.5
18 G 针头	VWR	C ABD305185	用于分装细胞外基质悬液 注入模具中
轨道摇床培养箱	SciLogex	832010089999	温度控制（37 °C）
血清移液管（10 mL）	Sarstedt	86.1254.001
血清移液管（25 mL）	Sarstedt	86.1685.001
氯化钠	BioShop	7647-14-5
磷酸二氢钠	BioShop	10049-21-5