脊髓提取：一种用于体外研究的小鼠脊髓分离方案

摘要

来源：Na'ara, S. 等. 体外模拟癌性神经侵袭：背根神经节模型. J. Vis. Exp. (2016)

在本视频中，我们介绍了一种从用于体外研究的小鼠模型中分离脊髓的逐步实验方案。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 脊髓的获取

1. 使用 CO₂  室处死小鼠。避免采用颈椎脱位法，因其可能因剪切力导致神经节根部损伤。此后所有步骤均需在无菌条件下进行。
2. 用 70% 乙醇浸泡动物。此步骤对消毒以及防止毛发带入内脏器官至关重要。
3. 让小鼠自然晾干乙醇。避免乙醇接触内脏器官，因其具有神经毒性。
4. 小鼠晾干后，用大头针将其固定于俯卧位（面部朝下），在每侧后肢和前肢各固定一枚大头针。
5. 使用镊子从颈部后方至腰椎沿中线做头尾方向切口。接着用镊子向两侧翻开皮瓣，暴露皮下组织。
6. 触摸小鼠颅骨直至到达颅颈交界处。将剪刀垂直于动物体位，在颅颈交界处（第 7^th  颈椎）用粗镊子剪断颈部肌肉和脊柱。用粗镊子向尾端解剖并逐段切除脊柱，直至达到腰椎水平（后肢对应水平）。
7. 在腰椎水平（第 5^th  腰椎）使用粗镊子完成完全的尾侧横断。
8. 将小鼠翻转至仰卧位（面部朝上）。无需覆盖切口，因为背根神经节（DRG）将从较低的椎体水平取出，而非颈椎区域。
9. 从颈部至腹部沿中线向下切开，将皮肤向两侧牵拉，再切开腹膜。
10. 整块移除腹膜腔内的内脏器官（肝脏、脾脏、胰腺、胃和肠） 。随后移除腹膜后器官（如肾脏和胰腺）。在头侧方向，打开胸壁。
11. 使用镊子和手术刀切断肋骨，保留脊柱两侧各 5 mm 的肋骨。此时脊柱已与身体其余部分分离。
12. 用冷的（4 °C）新鲜磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗脊柱两次，去除血液。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
镊子	Sigma-Aldrich	F4142
手术刀片	Sigma-Aldrich	Z309036
剪刀	Sigma-Aldrich	S3271
35 mm 玻璃底培养皿	de groot	60-627860
70% 乙醇	Sigma
冷 PBS	Biological industries	02-023-1A