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所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。
1. 脊髓的获取
- 使用 CO2 室处死小鼠。避免采用颈椎脱位法，因其可能因剪切力导致神经节根部损伤。此后所有步骤均需在无菌条件下进行。
- 用 70% 乙醇浸泡动物。此步骤对消毒以及防止毛发带入内脏器官至关重要。
- 让小鼠自然晾干乙醇。避免乙醇接触内脏器官，因其具有神经毒性。
- 小鼠晾干后，用大头针将其固定于俯卧位（面部朝下），在每侧后肢和前肢各固定一枚大头针。
- 使用镊子从颈部后方至腰椎沿中线做头尾方向切口。接着用镊子向两侧翻开皮瓣，暴露皮下组织。
- 触摸小鼠颅骨直至到达颅颈交界处。将剪刀垂直于动物体位，在颅颈交界处（第 7th 颈椎）用粗镊子剪断颈部肌肉和脊柱。用粗镊子向尾端解剖并逐段切除脊柱，直至达到腰椎水平（后肢对应水平）。
- 在腰椎水平（第 5th 腰椎）使用粗镊子完成完全的尾侧横断。
- 将小鼠翻转至仰卧位（面部朝上）。无需覆盖切口，因为背根神经节（DRG）将从较低的椎体水平取出，而非颈椎区域。
- 从颈部至腹部沿中线向下切开，将皮肤向两侧牵拉，再切开腹膜。
- 整块移除腹膜腔内的内脏器官（肝脏、脾脏、胰腺、胃和肠） 。随后移除腹膜后器官（如肾脏和胰腺）。在头侧方向，打开胸壁。
- 使用镊子和手术刀切断肋骨，保留脊柱两侧各 5 mm 的肋骨。此时脊柱已与身体其余部分分离。
- 用冷的（4 °C）新鲜磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗脊柱两次，去除血液。