使用 DAPI 染色进行细胞死亡筛查:一种在癌细胞系中快速筛查 IR 诱导的克隆形成细胞死亡的方法

Abstract

来源:Kobayashi， D. et al. 通过荧光显微镜评估辐射诱导克隆形成细胞死亡模式的一步方案。J. Vis. Exp.（2017 年）

该视频演示了使用 DAPI 染色测定法在电离辐射 （IR） 诱导的癌细胞系中筛选主要细胞死亡特征的方法。经历细胞死亡的靶细胞的 DAPI 染色细胞核表现出不同的形态，可以通过荧光显微镜轻松识别。

Protocol

1. 材料的准备

1. 高压灭菌器盖玻片
   1. 将盖玻片放入玻璃烧杯中。
   2. 用箔纸盖住玻璃烧杯。
   在
   3. 121 °C 下，15 psi 高压灭菌 20 分钟。
   4. 在 50 °C 下干燥。在室温下储存在培养罩中。
2. 准备固定液:3% 多聚甲醛 + 2% 蔗糖的磷酸盐缓冲盐水 （PBS） 溶液
   1. 向 1,000 mL 玻璃瓶中加入 700 mL PBS 和 30 g 多聚甲醛><。 谨慎:多聚甲醛具有腐蚀性，请戴适当的手套。
   2. 用微波炉加热至 80 °C 完全溶解多聚甲醛。
      谨慎:多聚甲醛烟雾有毒，请戴口罩。
   3. 在室温下放置过夜。
   4. 加入 20 克蔗糖。
   5. 加入 PBS 使总体积为 1 L。
   6. 分装在 50 mL 试管中。固定液可在 -20 °C 下储存 3 年或在 4 °C 下储存 3 个月。

2. 辐照

注意: 请按照制造商的说明小心处理....

Materials