磁珠法外泌体提取：一种从生物流体中分离特定外泌体的技术

摘要

来源：Tu, M. 等. 利用电场诱导释放与检测技术（EFIRM）检测外泌体生物标志物。J. Vis. Exp. (2015)

在本视频中，我们演示了一种利用磁性微珠从目标生物液体中分离外泌体的方法。该方法可快速捕获外泌体，适用于后续分析。

方案

1. 基于磁珠的外泌体提取

1. 在微量离心管中，用移液器将5 µL充分混匀的链霉亲和素包被磁性微粒溶液加入495 µL磷酸盐缓冲液（PBS）中，以重悬微珠。使用磁力架，用500 µL PBS洗涤并重悬微珠，共洗涤三次。该磁力架为一个带有侧置磁铁阵列的支架装置，可容纳样品微量离心管。
   1. 每次洗涤时，首先将离心管置于磁力架上静置1分钟，然后用移液枪头小心吸除上清缓冲液，避免扰动微珠。
   2. 将离心管转移至无磁铁的普通试管架上。向管中加入500 µL PBS，并用移液器吹打混合溶液与微珠。随后，将离心管重新放回磁力架，使微珠再次与溶液分离。
   3. 重复上述磁力分离与PBS重悬步骤共三次。此过程完成对磁性微粒的初步洗涤。
2. 将微珠重悬于490 µL PBS缓冲液中，离心管置于磁力架的非磁化区域。用移液器向微珠混合液中加入5 µL浓度为1.0 mg/mL的生物素化小鼠抗人CD63抗体储备液。使用移液器吹打混合微珠与抗体溶液。
3. 将含有微珠与生物素化抗体混合物的微量离心管置于样品旋转仪上。设置旋转仪参数为往复旋转，倾斜角度90°，持续5秒，振动角度5°，持续1秒。在室温下按此参数旋转样品-微珠混合管30分钟。
4. 偶联后去除未结合的抗体。
   1. 室温旋转30分钟后，将离心管重新置于磁力架上静置5分钟。
   2. 使用微量移液器吸....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
生物素标记的抗人CD63抗体	Ancell, USA	215-030
Dynabeads MyOne 链霉亲和素T1	Invitrogen, USA	65601
钕磁铁（1/10" 直径 × 1/32" 厚度）	K&J Magnetics, USA	DH101
超纯蒸馏水	Life Technologies, USA	10977-023
抗荧光素-POD Fab片段	Roche, Germany	11426346910
磷酸盐缓冲液（PBS）	Life Technologies, USA	10010023
酪蛋白/PBS	Fisher Scientific, USA	37532