基于磁珠的外泌体提取:一种从生物流体中分离特定外泌体的技术

摘要

来源:Tu， M. et al.通过电场诱导释放和测量 （EFIRM） 检测外泌体生物标志物。J. Vis. Exp.（2015 年）

在本视频中，我们演示了一种使用磁性微珠从目标生物体液中分离外泌体的程序。该程序能够快速捕获外泌体，可用于下游分析。

方案

1. 基于磁珠的外泌体提取

将
1. 5 μL 链霉亲和素包被的磁性微粒混合均匀的溶液移液到微量离心管中的 495 μL 磷酸盐缓冲盐水 （PBS） 缓冲液中，以重悬珠子。使用磁力架用 500 μL PBS 洗涤并重悬珠子 3 次。支架是外壳单元侧面的磁铁阵列，可以容纳样品微量离心管。
   1. 对于每次洗涤，首先让试管在架子上放置 1 分钟，然后使用移液器吸头小心地去除上清液缓冲液，而不会干扰珠子。
   2. 将试管放在侧面没有磁铁的普通架子上。将 500 μL PBS 加入试管中，并使用移液器将溶液和珠子混合在一起。然后，将试管放回磁力架上，再次将磁珠与溶液分离。
   3. 通过磁化并在 PBS 中重悬总共 3 次来去除缓冲液。这将对磁性颗粒进行初始洗涤。
2. 将磁珠重悬于 490 μL PBS 缓冲液中，将试管放在磁力架的非磁化部分。将 5 μL 生物素化小鼠抗人 CD63 抗体（1.0 mg/mL 储备液浓度）移液到磁珠混合物中。使用移液器将磁珠和抗体混合在溶液中。
3. 将带有珠子和生物素化抗体混合物的微量离心管放在样品旋转器上。设置样品旋转器的旋转器参数，以 90° 往复旋转 5 秒，以 5° 振动 1 秒。在 RT 下以这些参数旋转样品珠混合物管 30 分钟。
4. 偶联后去除未结合的抗体。
   1. 在 RT 下旋转 30 分钟后，将试管放回磁力架中 5 分钟。
   2. 使用微量移液器去除液相，并用 500 μL PBS 洗涤，对珠子进行 3 次洗涤。三重洗涤后，将微珠重悬于 490 μL 酪蛋白-PBS 中，并将它们放在支架的未磁化部分。
5. 使用抗体包被的微珠提取外泌体。
   1. 用目标样品 ID 标记每个试管。将 10 μL 血清或唾液样品移液到微量离心管中。使用移液器通过移液数次来混合样品和磁珠。
   2. 将带有样品和抗人 CD63 抗体珠的试管放在旋转器上，并在室温下旋转 2 小时。使用与步骤 1.3 中描述的相同的旋转器参数。
   3. 样品旋转 2 小时后，通过磁化将磁珠与溶液分离，用微量移液管去除液相，然后将磁珠重悬于 500 μL Tris-HCl 缓冲液中，进行三重洗涤。所得珠子现在与外泌体结合，并准备好进行电场释放和测量。

材料