从小鼠中提取完整肾脏：一种从小鼠模型中获取无肾包膜肾脏的技术

摘要

来源：Grainger, N. 等 通过振动切片法分离并成像小鼠肾盂完整起搏区域的活体组织。J. Vis. Exp. (2021)

在本视频中，我们描述了从小鼠腹膜后间隙取出肾脏的操作步骤。取出的肾脏可进一步进行显微解剖，以获得一个不含肾包膜及周围脂肪层的完整肾脏。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 肾脏解剖

1. 在通风橱中通过吸入3–4%异氟烷对小鼠进行麻醉。通过脚趾和/或尾巴夹捏反射消失确认深度麻醉后，采用颈椎脱位法处死小鼠。
2. 用70%乙醇润湿胸部毛发。使用外部解剖剪，沿纵轴做切口打开腹腔，剪刀刀刃朝外倾斜，以避免损伤内脏器官。
3. 使用内部组织镊子和内部解剖剪，夹住肠道并将其从腹壁提起。在提起肠道的同时，于近端十二指肠和远端结肠处剪断肠道下方与体壁的连接，以暴露包含肾脏的腹膜后腔。
4. 暴露肾脏后，逐个取出。用组织镊子轻轻夹住输尿管远端（距肾脏约4 mm处）并提起。使用解剖剪从夹持处沿输尿管下方朝肾脏方向剪开。继续沿肾脏下方剪切，直至肾脏完全脱离周围结缔组织。
   注意：为了在振动切片过程中最大限度地保持组织完整性和切片一致性，肾脏应尽可能保持完整。为此，避免使用镊子或解剖剪夹捏或切割肾脏本身。
5. 将带有输尿管的肾脏置于冰冻的KRB溶液中。对另一侧肾脏重复上述提取步骤，从动物体内取出。将肾脏保持在冰上的KRB溶液中。
   注意：应立即进入实验方案的下一阶段，以维持肾小球旁器（PKJ）组织的活性。由于PKJ....

结果

图1：肾脏基本解剖结构及PKJ起搏区域的位置。（A）完整肾脏示意图，显示肾盂（RP）和输尿管的方位。肾动脉和肾静脉分别以红色和蓝色表示。（B）沿矢状面切割完整肾脏，可暴露肾脏内部结构，包括髓质、乳头（集合管汇聚的远端髓质区域）以及近端和远端肾盂。（C）切除髓质和乳头后，可完全暴露盆肾连接部（PKJ）和近端肾盂（prox RP）。（D 和 E）分别为PKJ起搏区域和远端肾盂的透射光显微图像。沿肾盂远端连续切片时，PKJ区域的半月形.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
60 mm x 15 mm 培养皿	Sigma Aldrich	P5481	肾脏精细解剖皿
吸水纸	Fisher Scientific	06-666A	在应用<br/>胶水前干燥肾脏
B6;129S-Gt(ROSA)26Sor/J	The Jackson Laboratory	13148	GCaMP3 小鼠
B6;129S-Gt(ROSA)26Sor/J	The Jackson Laboratory	24105	GCaMP6f 小鼠
B6.FVB-Tg(Myh11-cre/ERT2)1Soff/J	The Jackson Laboratory	19079	smMHC-CRE 小鼠
C57BL/6-Tg(Pdgfra-cre)1Clc/J	The Jackson Laboratory	13148	PDGFRa-CRE 小鼠
乙醇	Phamco-Aaper	SDA 2B-6	用于解剖
超细邦恩剪刀	Fine Science Tools	14083-08	用作内部解剖剪
精细剪刀	Fine Science Tools	14060-09	用作外部解剖剪
细尖镊子	Fine Science Tools	11254-20	用于肾脏精细解剖
异氟烷	Baxter	NDC 1001936060	用于麻醉
硅弹性体	Fisher Scientific	NC9285739	Sylgard 184
学生型阿登森镊	Fine Science Tools	91106-12	用于轻柔夹持和移动<br/>肾脏
学生型杜蒙特镊	Fine Science Tools	91150-20	用作内部解剖镊
范纳斯弹簧剪	Fine Science Tools	15000-03	用于精细解剖和清理<br/>分离的肾脏