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方法文章

从小鼠中提取完整肾脏:一种从小鼠模型中获取无肾包膜肾脏的技术

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2023年4月30日

本文内容

摘要

来源:Grainger, N. 通过振动切片法分离并成像小鼠肾盂完整起搏区域的活体组织J. Vis. Exp. (2021)

在本视频中,我们描述了从小鼠腹膜后间隙取出肾脏的操作步骤。取出的肾脏可进一步进行显微解剖,以获得一个不含肾包膜及周围脂肪层的完整肾脏。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 肾脏解剖

  1. 在通风橱中通过吸入3–4%异氟烷对小鼠进行麻醉。通过脚趾和/或尾巴夹捏反射消失确认深度麻醉后,采用颈椎脱位法处死小鼠。
  2. 用70%乙醇润湿胸部毛发。使用外部解剖剪,沿纵轴做切口打开腹腔,剪刀刀刃朝外倾斜,以避免损伤内脏器官。
  3. 使用内部组织镊子和内部解剖剪,夹住肠道并将其从腹壁提起。在提起肠道的同时,于近端十二指肠和远端结肠处剪断肠道下方与体壁的连接,以暴露包含肾脏的腹膜后腔。
  4. 暴露肾脏后,逐个取出。用组织镊子轻轻夹住输尿管远端(距肾脏约4 mm处)并提起。使用解剖剪从夹持处沿输尿管下方朝肾脏方向剪开。继续沿肾脏下方剪切,直至肾脏完全脱离周围结缔组织。
    注意:为了在振动切片过程中最大限度地保持组织完整性和切片一致性,肾脏应尽可能保持完整。为此,避免使用镊子或解剖剪夹捏或切割肾脏本身。
  5. 将带有输尿管的肾脏置于冰冻的KRB溶液中。对另一侧肾脏重复上述提取步骤,从动物体内取出。将肾脏保持在冰上的KRB溶液中。
    注意:应立即进入实验方案的下一阶段,以维持肾小球旁器(PKJ)组织的活性。由于PKJ....

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结果

肾脏解剖结构与髓质、乳头切面图;尿路上皮细胞显微图像。
图1:肾脏基本解剖结构及PKJ起搏区域的位置。A)完整肾脏示意图,显示肾盂(RP)和输尿管的方位。肾动脉和肾静脉分别以红色和蓝色表示。(B)沿矢状面切割完整肾脏,可暴露肾脏内部结构,包括髓质、乳头(集合管汇聚的远端髓质区域)以及近端和远端肾盂。(C)切除髓质和乳头后,可完全暴露盆肾连接部(PKJ)和近端肾盂(prox RP)。(DE)分别为PKJ起搏区域和远端肾盂的透射光显微图像。沿肾盂远端连续切片时,PKJ区域的半月形.......

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
60 mm x 15 mm 培养皿Sigma AldrichP5481肾脏精细解剖皿
吸水纸Fisher Scientific06-666A在应用<br/>胶水前干燥肾脏
B6;129S-Gt(ROSA)26Sor/JThe Jackson Laboratory13148GCaMP3 小鼠
B6;129S-Gt(ROSA)26Sor/JThe Jackson Laboratory24105GCaMP6f 小鼠
B6.FVB-Tg(Myh11-cre/ERT2)1Soff/JThe Jackson Laboratory19079smMHC-CRE 小鼠
C57BL/6-Tg(Pdgfra-cre)1Clc/JThe Jackson Laboratory13148PDGFRa-CRE 小鼠
乙醇Phamco-AaperSDA 2B-6用于解剖
超细邦恩剪刀Fine Science Tools14083-08用作内部解剖剪
精细剪刀Fine Science Tools14060-09用作外部解剖剪
细尖镊子Fine Science Tools11254-20用于肾脏精细解剖
异氟烷BaxterNDC 1001936060用于麻醉
硅弹性体Fisher ScientificNC9285739Sylgard 184
学生型阿登森镊Fine Science Tools91106-12用于轻柔夹持和移动<br/>肾脏
学生型杜蒙特镊Fine Science Tools91150-20用作内部解剖镊
范纳斯弹簧剪Fine Science Tools15000-03用于精细解剖和清理<br/>分离的肾脏

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