患者来源的肿瘤异种移植：一种用于评估尿路上皮细胞癌的实验性小鼠模型构建技术

摘要

来源：Moret, R. 等. 人源性原位异种移植模型用于人尿路上皮细胞癌和结直肠癌肿瘤生长及自发性转移研究 视频实验杂志 (2019)

本视频介绍了建立实验性异种移植小鼠模型的步骤，该模型可用于研究尿路上皮细胞癌的进展。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. UCC 小鼠模型

1. 实验小鼠的术前准备
   1. 取6至8周龄的雌性NOD/SCID小鼠。使用脱毛膏去除小鼠下背部的毛发。将小鼠置于诱导室中，用异氟烷（2.5%，以100%氧气为载体，流速1 L/min）进行麻醉。
   2. 待小鼠进入镇静状态后，将其置于仰卧位，鼻部接入异氟烷鼻罩，背部裸露并牢固接地于分散电极上。
      注意：若小鼠对脚趾夹捏无反应，则表明已完全镇静。
2. 取收获的UCC肿瘤细胞，将其重悬于50 µL RPMI培养基中。使用血管导管将UCC细胞注入膀胱（图1Aa, Ab）。
   1. 设置单极电灼仪，功率调至4 W。用润滑胶将24 G无菌血管导管润滑后，经雌性小鼠尿道插入。
      注意：插入过程中可能会感到轻微阻力。可轻柔向前推进，或退出导管后重复操作。切勿强行插入。若导管插入时发生弯曲，可将无菌导丝插入导管约一半长度以提供支撑稳定性。
   2. 将直径0.025英寸的固定芯直导丝完全插入，使其超出血管导管末端1 mm。
      注意：操作前应在导丝上用胶带标记1 mm的停止位置，以确保操作一致性。
   3. 将单极电灼针头接触导丝1秒，使膀胱黏膜受到电刺激。
   4. 将一支新的无菌血管导管连接至1 cc鲁尔锁式注射器，抽取200 µL收集的细胞悬液。
      注意：从血管导管到注射器的过程中至少会损失100 µL液体。计算所需细胞悬液体积时，应补偿该损失体积。
   5. 将导丝和血管导管从小鼠尿道中取出。将连接有细胞注射器的血管导管重新插入尿道。
      注意：此时推进应比之前更容易。
   6. 向小鼠膀胱内注入50 µL细胞悬液。拔出血管导管前等待数秒，以使细胞充分黏附于膀胱壁。
      注意：细胞将保留在膀胱内并发展为原位肿瘤。

结果

图1：原位膀胱尿路上皮癌（UCC）小鼠模型。 （Aa）将套管针插入雌性NOD/SCID小鼠的膀胱，并通过导丝对膀胱壁施加电灼刺激。（Ab）将表达荧光素酶的UCC肿瘤细胞BlCaPt15（2 × 10⁴ 个细胞）或BlCaPt37（5 × 10⁵ 个细胞），联合3 × 10⁵ 个淋巴结来源的基质HK细胞，经由套管针灌注至NOD/SCID小鼠膀胱内。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
脱毛膏	Church & Dwight Co., Inc	1(800)248-8820
异氟烷	Henry Schein Animal Health	108333
6-8 周龄 NOD/SCID 小鼠（雌性）	Jackson Lab	1303
镊子	Symmetry Surgical Inc	06-0011
电外科发生器	ValleyLab	FORCE1C20
异氟烷诱导室	Perkin Elmer	119038