大鼠肾脏脱细胞制备：一种由收获的大鼠肾脏生成无细胞血管化全器官支架的方案 关键词：脱细胞，器官支架，大鼠肾脏，血管化，组织工程，再生医学

摘要

来源：Kim, E. H. 等 大鼠脱细胞肾脏支架的制备。J. Vis. Exp. (2021)

本视频介绍了大鼠肾脏脱细胞的制备过程。所获得的无细胞血管支架可作为器官移植物组织工程的一个有前景的平台。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 肾脏获取与脱细胞

1. 取左侧肾脏，连同腹主动脉和下腔静脉。
2. 结扎输尿管、胸主动脉、上腔静脉以及腹主动脉的分支。
3. 将器官置于10 cm培养皿中的杜氏磷酸盐缓冲液（DPBS）中以保持湿润。
4. 使用23G导管插管腹主动脉和下腔静脉。为清除残留血液，将导管连接至蠕动泵，以37 °C、5 rpm的速度用DPBS（500 mL）和16 U/mL肝素灌注90分钟。
5. 为对肾脏进行脱细胞处理，先以40 mmHg的恒定压力用1% Triton X-100（1 L）灌注3小时，随后用0.75%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液（2 L）灌注6小时。
   注意：肾脏在8小时后将变为透明。
6. 为去除残留的SDS，先用含1%青霉素的蒸馏水（6 L）灌注18小时（过夜），再用无菌DPBS（500 mL）和16 U/mL肝素灌注90分钟。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
聚乙烯50号导管，导管管路100英尺	Braintree Scientific	.023" × .038”
3-0丝线卷装，用于大鼠血管通路/结扎	Braintree Scientific	SUT-S 110
精细剪刀，用于剪开筋膜/结缔组织	Fine Science Tools	14058-09
25号英寸引导针（用于血管导管）	Becton Dickinson	305145
Schwartz微型血管止血钳	Fine Science Tools	18052-01（直型）
5-0丝线卷装，用于小鼠血管通路/结扎	Braintree Scientific	SUT-S 106