膀胱肿瘤类器官模型：将膀胱类器官原位移植至受体小鼠膀胱的方法

摘要

来源：Kim, Y. 等. 小鼠膀胱肿瘤类器官的培养、操作及原位移植。 J. Vis. Exp. (2020)

在本视频中，我们描述了将培养的膀胱肿瘤类器官原位移植到小鼠膀胱中，以研究器官微环境对肿瘤发生发展的作用。

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 膀胱肿瘤类器官的传代培养

注意：建议在膀胱肿瘤类器官直径达到100–150 µm时进行传代。

1. 在含有肿瘤类器官的24孔板的类器官培养基中加入500 µL胶原酶/分散酶。用移液器反复吹打基底膜基质和培养基。在37 °C孵育20分钟，然后将细胞收集至15 mL离心管中。
   注意：在显微镜下观察从基底膜基质中分离的类器官。如果类器官未从基底膜基质中脱离，可延长孵育时间或增加吹打次数。
2. 加入5 mL预热的DMEM，于4 °C以400 × g离心3分钟，并吸除上清液。
3. 用1 mL预热的0.25%胰蛋白酶-EDTA和10 µM Y-27632重悬沉淀。在37 °C水浴中孵育5分钟。剧烈吹打细胞数次，然后加入5 mL含10%胎牛血清（FBS）的DMEM以中和胰蛋白酶。
4. 于4 °C以400 × g离心3分钟，并吸除上清液。
5. 用1 mL预热的类器官培养基重悬沉淀，并计数单个肿瘤细胞的数量。

2. 膀胱类器官的原位移植（图1A....

结果

图 1：膀胱肿瘤类器官的原位移植。（A）膀胱肿瘤类器官原位移植至裸鼠的示意图。（B）接受膀胱肿瘤类器官原位移植的小鼠膀胱及其H&E染色切片的代表性图像。中间图中框选区域的放大视图显示在左侧图中。比例尺 = 500 µm。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
15 mL 锥形管	 SPL	 50015
24 孔板	 Corning	 3526
29 G 1/2 胰岛素注射器	 SHINA	 B299473538
50 mL 锥形管	 SPL	 50050
A8301	 Tocris	 2939	 储存浓度：25 mM
无水乙醇	 Daejung	 4023-2304
可吸收缝合线	 Henry Schein	 039010
高级 DMEM/F-12	 Thermo	 12634028
CAnN.Cg-Foxn1nu/Crl（裸鼠）	 Charles River	 194
I 型胶原酶	 Thermo	 17100017	 储存浓度：20 mg/mL
II 型胶原酶	 Thermo	 17100015	 储存浓度：20 mg/mL
胶原酶/分散酶	 Sigma	 10269638001	 储存浓度：1 mg/mL
DMEM（Dulbecco 改良最低必需培养基）	 Gibco	 11965-118
DMSO（二甲基亚砜）	 Sigma	 D8418
DPBS（Dulbecco 磷酸盐缓冲液）	 Welgene	 LB 001-02
生长因子减少型 Matrigel（GFR）	 Corning	 354230	 用于板中类器官培养
高浓度 Matrigel（HC）	 Corning	 354248	 用于类器官移植
1.5 mL 微量离心管	 Axygen	 MCT-150-C
剃须刀片
生理缓冲液	 JW Pharmaceutical
胰蛋白酶-EDTA（0.25%）	 Gibco	 25200072
超速离心管	 Beckman Coulter	 331372
Y-27632 二盐酸盐	 Abmole	 M1817	 储存浓度：10 mM