固相微萃取采样：一种用于移植物组织样本提取的探针式技术

摘要

来源：Stryjak, I. 等 利用化学活检进行移植物质量评估。J. Vis. Exp. (2020)

在本视频中，我们演示了使用固相微萃取探针从已获取的供体肾脏中提取代谢物的方法。所提取的代谢物可用于进行代谢组学和脂质组学分析，以评估器官移植的质量。

方案

所有涉及人类参与者的操作均按照机构、国家和国际的人类福利指南进行，并已通过当地机构审查委员会的审查。

1. 探针的制备

1. 准备钛镍合金探针（40 mm 长度；0.2 mm 直径），表面涂覆 7 mm 混合模式吸附剂。探针数量取决于整个实验过程中设定的时间点以及重复次数（建议每个时间点设置 3 次重复）。
   注意：提取相的长度和类型可根据研究模式、代谢物的极性以及样品基质进行调整。
2. 配制清洗液，由氯仿:甲醇（2:1，v/v）组成。将 1.0 mL 该溶液移入每个 2.0 mL 玻璃小瓶中，并将已预先穿刺瓶盖的探针各放入一个小瓶中。
   注意：使用前需清洗所有探针，以去除可能存在的污染物颗粒。
3. 将小瓶置于振荡器上，设置振荡速度为 1,200 rpm。45 分钟后停止设备，并用液相色谱-质谱级水冲洗探针涂层。
4. 由于涂层需经过预平衡步骤以实现活化，因此配制预平衡溶液，由甲醇:水（1:1，v/v）组成。将 1.0 mL 该溶液移入每个 2.0 mL 玻璃小瓶中，并将已预先穿刺瓶盖的探针各放入一个小瓶中。
5. 将小瓶置于涡旋振荡器上，设置振荡速度为 1,200 rpm。
6. 60 分钟后，停止振荡器，并用液相色谱-质谱级水冲洗探针涂层。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
乙酸	Merck	5330010050	流动相添加剂
乙腈	Alchem	696-34967-4X2.5L	HPLC溶剂
乙酸铵	Merck	5330040050	流动相添加剂
BENCHMIXER XL MULTI-TUBE VORTEXER	Benchmark Scientific	BV1010	涡旋混合器
瓶盖	Perlan Technologies	5183-2076	蓝色螺口盖，预切PTFE/硅胶垫片，100个/包
氯仿	Merck	1024441000
Discovery HS F5 Supelguard 保护柱，3 μm，L × I.D. 2 cm × 2.1 mm	Merck	567570-U	HPLC保护柱
Discovery HS F5，2.1 mm x 100 mm，3 μm	Merck	567502-U	HPLC色谱柱
甲酸	Alchem	497-94318-50ML	流动相添加剂
玻璃小瓶	Perlan Technologies	5182-0714
HILIC Luna 3 μm，200A，100 x 2.0 mm	Shim-Pol	PHX-00D-4449-B0	HPLC色谱柱
HILIC SecurityGuard 保护柱，3 μm，4 x 2.0 mm	Shim-Pol	PHX-AJ0-8328	HPLC保护柱
异丙醇	Alchem	231-AL03262500	HPLC溶剂
甲醇	Alchem	696-34966-4X2.5L	HPLC溶剂
纳米纯水	Merck	1037281002	HPLC溶剂
Q Exactive Focus 混合四极杆-Orbitrap 质谱仪	Thermo Scientific	Q Exactive Focus	质谱仪
SeQuant ZIC-cHILIC 3µm,100Å 100 x 2.1 mm	Merck	1506570001	HPLC色谱柱
SeQuant ZIC-HILIC 保护柱套件 20 x 2.1 mm	Merck	1504360001	HPLC保护柱
SPME LC 纤维探针，混合模式	Supelco	prototype fibers
UltiMate 3000 HPLC 系统	Thermo Scientific	UltiMate 3000	HPLC系统
小瓶内插管（去活化）	Perlan Technologies	5181-8872
XSelect CSH C18 3.5μm 2.1x75mm	Waters	186005644	HPLC色谱柱
XSelect CSH C18 VanGuard 保护柱 3.5μm, 2.1x5mm	Waters	186007811	HPLC保护柱