固相微萃取采样:一种基于探针的移植物组织样品提取技术

Abstract

来源:Stryjak， I. et al. 使用化学活检进行移植物质量评估。J. Vis. Exp. （2020）

在本视频中，我们演示了基于 SPME 探针的代谢物从预先收获的供体肾脏中提取代谢物。提取的代谢物可用于进行代谢组学和脂质组学分析，以评估移植的器官质量。

Protocol

所有涉及人类参与者的程序均已按照机构、国家和国际人类福利准则执行，并已由当地机构审查委员会审查。

1. 探针的准备

1. 准备涂有 7 mm 混合模式吸附剂的钛镍合金探针（40 mm 长;0.2 mm 直径）。探针的数量取决于整个过程中的目标时间点和重复次数（建议每个时间点 3 个）。
   注意:萃取阶段的长度和类型可以根据研究模式、代谢物的极性和样品基质进行调整。
2. 制备由 2:1 氯仿:甲醇 （v/v） 组成的清洁混合物。将 1.0 mL 溶液移液到每个 2.0 mL 玻璃样品瓶中，并将一个探针（之前刺穿瓶盖）放入每个样品瓶中><。 注意:使用前，请清洁所有探头以去除污染颗粒。
3. 将样品瓶放在搅拌器上，并将搅拌速度设置为 1,200 rpm。45 分钟后，停止设备并用 LC-MS 级水冲洗涂层。
4. 由于涂层必须经过预处理步骤才能活化它们，因此请制备由 1:1 甲醇:水 （v/v） 组成的预处理混合物。将 1.0 mL 溶液移液到每个 2.0 mL 玻璃样品瓶中，并在每个样品瓶中放置一个探针，之前刺穿瓶盖。
5. 将样品瓶放在涡旋搅拌器上，并将搅拌速度设置为 1,200 rpm。
6. 60 分钟后，停止搅拌器并用 LC-MS 级水冲洗涂层。
7. ....

Materials