建立小鼠正位膀胱肿瘤模型：将癌细胞经膀胱内灌注植入小鼠膀胱的操作步骤 关键词：正位肿瘤模型，膀胱肿瘤，小鼠模型，膀胱内灌注，癌细胞植入

摘要

来源：Tham, S. M. 等。一种小鼠原位膀胱肿瘤模型及肿瘤检测系统 J. Vis. Exp. (2017)

在本视频中，我们介绍了将癌细胞注入小鼠模型膀胱的经膀胱灌注操作。该操作有助于建立正位膀胱肿瘤模型，可用于开发治疗策略。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 植入肿瘤

注意：每只小鼠在膀胱内接种 1 × 10⁵ MB49-PSA 细胞，悬浮于 50 µL 的 DMEM 无菌培养基中。由于导管存在死腔，务必额外准备一定体积的细胞悬液（每只小鼠至少多准备 100 µL）。另一种替代方法是使用充满空气的注射器。

1. 细胞
   1. 植入前一天，当细胞融合度约为80%时，以1:2的传代比例将MB49-PSA肿瘤细胞传代至含完全DMEM培养基（补充10% FBS、2 mmol/L L-谷氨酰胺、0.05 mg/mL青霉素-链霉素和200 µg/mL潮霉素B）中，在37 °C、5% CO₂ 条件下培养。
   2. 在操作当天，用无菌细胞刮刀轻轻刮取细胞收集细胞。取等体积的细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液混合，使用血细胞计数板计数活细胞。若死亡细胞超过20%，则不得用于植入。
   3. 计算所需活细胞数量（2 × 10⁶ 个细胞/mL），并将细胞转移至15 mL离心管中。在4 °C条件下以250 ×g离心5分钟，弃去上清液。用无血清DMEM培养基重悬细胞沉淀。....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
MB49-PSA 细胞			参考文献（Wu QH, 2004）
杜尔贝科改良伊格尔 培养基（DMEM）	Biowest	L0102
南美胎牛血清（FBS）	Biowest	S1810
优质南美胎牛血清（FBS）	Biowest	S181B
胎牛血清（FBS）	HyClone	SH30088.03
L-谷氨酰胺 Biowest X0550	Biowest	X0550
青霉素-链霉素	Biowest	L0022
潮霉素B	Invitrogen	10687-010
C57BL/6J 雌性小鼠	In Vivos		4-6 周龄
麻醉剂（75 mg/kg 氯胺酮和 1 mg/kg 美托咪啶）	本地药房
逆转药物（1 mg/kg 阿替美唑）	本地药房
耳标打孔器	Electron Microscopy Sciences	72893-01
哈特曼溶液或复方乳酸钠	B Braun
眼用软膏 - Duratears 无菌眼用润滑软膏	Alcon
热敷包 - HotHands 暖手袋	Heatmax Inc
Introcan Certo 静脉留置针	B Braun	4251300	24 G x 3/4″
Aquagel 润滑胶	本地药房
聚-L-赖氨酸溶液，0.01%	Sigma	P4707