通过闪冻法制备肿瘤类球体组织块：一种在冷冻基质块中保存肿瘤类球体的方法

摘要

来源：Wang, Y. 等 用于研究膀胱癌侵袭及评估治疗药物的三维细胞培养系统。J. Vis. Exp. (2018)

本视频展示了通过快速冷冻制备肿瘤类球体块的方法，该技术将感兴趣的组织样本冷冻至超低温，从而将类球体固定在基质内。

方案

1. 含癌细胞球体的样本块制备用于冷冻组织切片

1. 使用小镊子小心地将胶原凝胶块及类球体从腔室载玻片中取出，放入一个塑料组织学模具中。
2. 用1×PBS短暂冲洗胶原凝胶，然后在室温下用PBS配制的4%多聚甲醛（PFA）固定30分钟。
   注意：PFA为潜在致癌物，操作时应谨慎。
3. 在摇床上用1.5 mL 1×PBS洗涤胶原凝胶15分钟，更换PBS后重复该洗涤步骤3次。
4. 在新的塑料组织学模具底部涂布一层薄薄的包埋剂（OCT，约3 mm），将已固定并洗涤的胶原凝胶置于OCT包埋剂上，然后小心地用OCT填充模具，完全包埋整个凝胶，同时避免产生气泡。
5. 将模具置于4 °C环境中1小时。
6. 将含有样品和OCT包埋剂的模具放置于浮在液氮上的100 mm培养皿中，使样品迅速冷冻完全。
7. 将冷冻后的样品块储存于-80 °C，以备后续使用。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
DMEM细胞培养基	Thermo Fisher Scientific	11995065
胎牛血清	Thermo Fisher Scientific	26140079
抗生素-抗真菌素（100倍浓度）	Thermo Fisher Scientific	15240062
牛血清白蛋白（BSA）	Sigma-Aldrich	A3803
磷酸盐缓冲液（PBS）， pH 7.4	Thermo Fisher Scientific	10010023
大鼠尾胶原I型，高 浓度	Corning	354249
Nunc Lab-Tek II 带腔室 玻片	Thermo Fisher Scientific	155382
多聚甲醛溶液	Electron Microscopy Sciences	15710
O.C.T. 包埋剂	Thermo Fisher Scientific	23730571