使用电穿孔法将siRNA封装入外泌体：一种基于电脉冲的siRNA外泌体装载技术

摘要

来源：Faruqu, F. N. 等. 用于向癌细胞递送siRNA的外泌体制备。J. Vis. Exp. (2018)

本视频介绍了一种基于电穿孔技术将siRNA封装入外泌体的方法。携带siRNA的外泌体随后可用于治疗应用。

方案

1. 通过电穿孔将siRNA封装入外泌体

1. 预冷电穿孔比色皿（参见 材料表在电穿孔前，将样品置于冰上孵育30分钟。
2. 将 7.0 µg 外泌体（来自 7 x 10¹⁰ 个细胞的 32 µL）与¹² p/mL 储液）与 0.33 µg siRNA（12 µL 来自 RNase-free 水中的 2 µM 储液）加入微量离心管中。用柠檬酸缓冲液定容至 150 µL（见 材料表此时，外泌体与siRNA的摩尔比为1:60。
3. 将混合物转移至电穿孔比色皿中。盖上比色皿盖，将其放入电穿孔仪的比色皿槽内（参见 材料表）。顺时针旋转转轮180°。
   注意： 必须将旋钮完全旋转至锁定位置，以使比色皿与电极接触。
4. 选择所需的电穿孔程序（例如，X-01、X-05、A-20、T-20、T-30 等）.）并按下启动按钮开始电穿孔。
   注意： 成功的脉冲以显示“OK”为标志 在显示屏上。
5. 电穿孔完成后，将旋钮逆时针旋转180°复位，取出比色皿。用塑料移液器从比色皿中吸出样品，进行后续处理。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Atto655-siRNA	Eurogentec	SQ-SIRNA	（标记链 S）UGC-GCU-ACGAUC-GAC-GAU-G55；（未标记反义链 AS）CAU-CGU-CGA-UCG-UAGCGC-A55。
玻璃移液管	Fisher Scientific	1156-6963
Amaxa Nucleofector I	Lonza	Nucleofector I	配合 Amaxa’s Nucleofector 试剂盒使用
含 EDTA 的柠檬酸缓冲液			将 0.1954 g 柠檬酸和 0.2087 g 磷酸氢二钠溶于 50 mL 去离子水中。加入 EDTA 至终浓度 0.1 mM。调节 pH 至 4.4。
微量离心管	Starlab	S1615-5500	1.5 ml